中压特制玻璃层析柱 柱内压可增加（5bar～7bar）75m

做好抗体标记，这4种方法你都用对了吗？

的比率，罗丹明的测量波长在 550nm 和 280nm 。荧光素的吸光值比例（ 496nm/280nm ）应在 0.3 ～ 1.0 之间，罗丹明的吸光值比率（ 550nm/280nm ）在 0.3 ～ 0.7 之间。低于上述比率将导致低信号，高比率则出现高背景。若比率太低，应使用低浓度抗体与高浓度染料重复结合；若比率太高，则可适当调整后重新标记，或通过 DEAE 离子交换层析柱进一步纯化抗体。用 10mmol/L 磷酸钾（ pH8.0 ）平衡并灌注滤柱，通过增加盐浓度进行梯度洗脱。测量每一组分的吸光

抗体纯化：deae-sephadex a-50 柱层析法

于滴定架上，柱底垫一圆形尼龙纱，出水口接一乳胶或塑料管并关闭开关。②将0.1mol/l ，pH7.4PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入经预处理并以同上缓冲液调成稀糊状的a-50。等a-50。等a-50凝胶沉降2～3cm高时，开启出水口螺旋夹，控制流速1ml/min，同时连续倒入糊状a-50凝胶至所需高度。③关闭出水口，待a-50凝胶完全沉降后，柱面放一圆形滤纸片，以橡皮塞塞紧柱上口。通过插入橡皮塞之针头及所连接的乳胶或塑料管与洗脱液瓶相连接。（3）平衡启开出水口螺旋夹，控制流速12～14滴

DEAE离子交换吸附试验

8.　A-50凝胶的再生:在柱上先以2M NaCl洗柱上的杂蛋白至流出液的OD280nm〈0.02，再以蒸馏水洗去柱中盐。然后按预处理过程将A-50再处理一遍即达再生。近期用时泡于洗脱缓冲液中4℃保存;近期不用时，以无水酒精洗2次，再置50℃温箱烘干，装瓶内保存。 (四)　注意事项 1.　柱的选择：从理论上说，只要柱足够长，就得获得理想的分辨率，但由于层析柱 流速同压力梯度有关，柱长增加使流速减慢，峰变宽，分辨率降低。柱的直径增加，使液体流动的不均匀性增加，分辨率明显下降