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- AC10825-10*100μl
- 2025年07月05日
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T7pLysY Competent Cells
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20
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上海吉至生化科技有限公司
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文献和实验本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。图32 The TA Cloning® ConceptTopo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit）Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T
3.0载体、pCDNA3.1 myc his C载体和pEGFP载体） .0的MCS两端有T7和SP6 如果我用T7和SP6作为引物，则 1.P出大小约150bp的片段，则为MCS序列，无插入片段 2,若有插入片段，则应该为目的大小+152bp 如下图所示： 后再改进为T7+目的基因下游引物（目的基因-R），或者目的基因上游引物（目的基因-F)+SP
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