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- 英文名:
Recombinant GFP 重组绿色荧光蛋白
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20
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上海吉至生化科技有限公司
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文献和实验dmdfe 本人将GFP基因后面加了一段大约110bp的序列,插入PET28A的BamH1和Hind3位点,最后在BL21中表达。 经SDS-PAGE验证表明: 目的蛋白 大量存在菌体裂解后沉淀即包涵体中,但是该沉淀无色。 少量存在于上清中,上清显微弱的绿色。 看文献大量报道GFP融合蛋白几乎都形成可溶性表达,目的蛋白在上清中,并且诱导条件没有太大要求。 想请教一下各位做过GFP原核表达的经验
一、 GFP背景概述 绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)最早由Osamu Shimomura于1962年在水母(Aequorea victoria)(图2a)中发现。这种蛋白质在蓝色波长范围的光照激发下发出绿色荧光,其发光过程需要冷光蛋白质Aequorin的帮助,而且,这个冷光蛋白质可与钙离子(Ca2+)相互作用(图3)。在Aequorea victoria中发现的野生型绿色荧光蛋白的分子量较小,仅为27~30kDa,而编码GFP的基因序列也很短
一、实验目的 1.了解绿色荧光蛋白和共聚焦扫描显微镜在细胞分子生物学中的应用 2.学会使用质膜蛋白的分析软件。 二、带GFP的质膜蛋白分选概述 1.质膜蛋白的跨膜信号 在粗面内质网上合成的蛋白质有两类:分泌蛋白和膜蛋白,分泌蛋白在内质网上合成之后通过多种信号切除后释放到内质网的腔中,进行下游途径的转运。膜蛋白较为复杂,它要靠疏水区滞留在内质网膜上。下面以酵母二价
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