Caspase 8分光光度法检测试剂盒

商品属性：

型号	LZ-01X6388
发货周期	1～3天
英文名称	Caspase-8 Colorimetric Assay Kit
产品规格	20T|50T|100T

商品描述：
本试剂盒适用于培养细胞及新鲜组织caspase-8 检测。Caspase 家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用。在CD95 凋亡途径中， Caspase-8 作为最上游的级联酶，可被TNF 激活。受细胞表面受体（如Fas）的激活，Caspase-8 能引起下游级联酶的活性，如Caspase-3。Caspase-8 在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；但在细胞发生凋亡阶段，它可被激活。Caspase-8 分光光度法检测试剂盒就是将caspase-8 序列特异性的多肽偶联至发色基团，当该底物被caspase-8 剪切后，发色基团即游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，可考察caspase-8 的活化程度。


储存条件：
低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。

产品特点：
1. 对某些凋亡诱导剂引起的细胞凋亡可能存在非依赖于Caspase-8 活化的机制，这种情况时利用本试剂盒检测Caspase-8 活性无明显改变，需要考虑凋亡机制中的其他信号通路。
2. Caspase-8 Substrate 避光保存及使用。
3. 细胞数量需达到3~5×106 个或新鲜组织100mg，以便能达到测定需要的100~200μg 蛋白的要求，因为Caspase-8 的活性与细胞裂解液的蛋白含量有关，如测定的OD 值偏低，可通过增加细胞数量或组织量的方法来提高蛋白量。


试剂盒组成：


下列是公司正在出售的产品：
人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)试剂盒elisa　SH2-containing protein,SHC/SLP-76 ELISA Kit
人抗胸腺细胞球蛋白(ATG)检测试剂盒elisa　Salusin α ELISA Kit
人抗表皮细胞基底膜抗体(EBMZ)ELISA试剂盒　Salusin Beta,Salusin β ELISA Kit
人抗中性粒/中心体抗体(ACA)试剂盒ELISA　Salusin Alpha,Salusin α ELISA Kit
人抗白蛋白抗体(AAA)ELISA检测试剂盒　SAALDL ELISA Kit
人抗浦肯野细胞抗体/抗Yo抗体(PCA-1/Yo)elisa试剂盒　SAA/LDL Complex ELISA kit
人抗Sa抗体(anti-Sa-Ab)试剂盒elisa　S100P ELISA Kit
人抗Sa抗体(anti-Sa-Ab)检测试剂盒elisa　S100 calcium binding protein A9/calgranulin B,S100A9 ELISA Kit
人抗神经元核抗体2型/抗Ri抗体(ANNA-2/Ri)ELISA试剂盒　S100 calcium binding protein A8/calgranulin A,S100A8 ELISA Kit
人异质型核糖核蛋白复合物/抗RA33抗体(hnRNP/RA33)试剂盒ELISA　S100 calcium-binding protein A8/A9 complex,S100A8/A9 Elisa kit
人抗Q热抗体(anti-Q-Ab)ELISA检测试剂盒　S100A6 ELISA Kit
人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)elisa试剂盒　S100A12 ELISA Kit
人PL7抗体/抗苏氨酰tRNA合成酶(PL7)试剂盒elisa　S100A11 ELISA Kit
人PL12抗体/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)检测试剂盒elisa　S-100 ELISA Kit
人抗Mi2抗体(anti-Mi2-Ab)ELISA试剂盒　Soluble protein-100，S-100 ELISA Kit
人抗Ku抗体(anti-Ku-Ab)试剂盒ELISA　S-100B ELISA Kit
人抗IgA抗体(anti-IgA-Ab)ELISA检测试剂盒　Soluble protein-100B，S-100B ELISA Kit
Caspase 8分光光度法检测试剂盒人抗神经元核抗体1型/抗Hu抗体(ANNA-1/Hu)elisa试剂盒　FUS/TLS ELISA kit
人抗DNA酶B抗体(anti-DNaseB)试剂盒elisa　Rho family GTPase 1,RND1 ELISA Kit
人抗BP180抗体(BP180-Ab)检测试剂盒elisa　Rock-2 ELISA Kit
人抗BB抗体(BB-Ab)ELISA试剂盒　ARHGDIA/GDIA1 ELISA kit


使用方法：

1. 样品裂解
   1. 细胞裂解方法
      1. 用适当的方法诱导细胞凋亡，同时设立阴性对照组，并收集细胞；
      2. 用PBS洗涤细胞二次(离心2000rpm，5min)收集3～5×10⁶个细胞，尽量去除PBS上清；
      3. 在收集的沉淀细胞中加入50μL冰冷Lysis Buffer(注意：使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT)，吹打均匀；
      4. 置冰上裂解20～60min，其间涡旋振荡3～4次，每次10 s；或冻融2～3次；
      5. 4℃，离心(10000rpm) 1min；
      6. 小心吸取上清(含裂解的蛋白质)转移至新的管中，并放置冰上待用；
      7. 取少量上清(1～2μL)，常规方法(Bradford法)测定其中的蛋白浓度；
   2. 组织裂解方法
      1. 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入50μL冰冷Lysis Buffer(注意：使用前每50μL Lysis Buffer加入0.5μL DTT)，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；
      2. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，10000转/分，4℃离心5min；
      3. 小心吸取上清(含裂解的蛋白质)转移至新的管中，并放置冰上待用；
      4. 取少量上清(1～2μL)，常规方法(Bradford法)测定其中的蛋白浓度；
2. Caspase-8检测
   1. 吸取50μL含100～200μg蛋白的细胞或组织裂解上清；如体积不足50μL用10mM PBS,pH7.2~pH7.6补足至总体积50μL(各组均采用同样的蛋白量进行测定和比较)；
   2. 加入50μL的2×Reaction Buffer(注意：使用前每50μL 2×Reaction Buffer加入0.5μL DTT)；
   3. 加入5μL Caspase-8 Substrate并于37℃避光孵育4小时；
   4. 用酶标仪或分光光度计(100μL的比色皿)在λ=405nm或400nm测定其吸光值。通过计算OD_诱导剂/OD_阴性对照的倍数来确定凋亡诱导剂组Caspase-8活化程度。