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- 百蓁生物作为蛋白从头测序技术的发明者，我们拥有经验丰富的技术团队和先进的Orbitrap Eclipse、timsTOF pro2等质谱仪，近年来已完成近千个抗体和重组蛋白的测序和鉴定服务。 服务优势： 准 ：抗体/蛋白序列100%准确 全 ：抗体/蛋白从头测序和糖基化的分析步到位，解析生物药更全面的信息; 强 ：强大的糖肽解析能力，如发现CDR区域的关键糖基化修饰等; 深 ：深入发现每一个糖基化位点，提供基于位点的糖型结构及比例。
- 武汉
- 2026年04月30日
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- 技术资料
- 提供商：
百蓁生物
- 服务名称：
单抗/蛋白从头测序
◆服务介绍
多肽 (10-50AA)、重组蛋白、纳米抗体 (15kDa)、单克隆抗体 (150kDa)、多克隆抗体等蛋白分子的一级结构是发挥其生物学功能的核心，因此，对蛋白质完整序列准确快速的分析有助于未知蛋白质的功能研究。相比传统的数据库搜索法和 Edman 降解，基于质谱的从头测序可以不借助任何蛋白质或者 DNA 数据库信息，直接对蛋白质的序列进行分析。
百蓁生物拥有BSI 授权的质谱抗体测序技术、自主知识产权的 PEAKS 系列分析软件和经验丰富的专业技术服务团队。目前，我们的标准程序结合了自上而下和自下而上的质谱技术，确保了每一个氨基酸的正确性和全抗体的序列精度，包括 N 末端及 C 末端的修饰和 N- 连接的聚糖，可弥补传统蛋白质鉴定方法在未知蛋白质序列和突变分析上的不足。
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服务类型 |
服务内容 |
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经典测序 |
最快 2 个工作日内可交付抗体全长氨基酸序列，正式报告包含报告实验过程、蛋白序列、二级图谱支撑、I/L 区分列表等信息。 |
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活性保证测序 |
依据测序获得的抗体序列，进行构建表达纯化，交付 3 mg 重组抗体；客户验证抗体活性成功后，交付抗体全长测序报告；项目周期 6 周。 |
◆技术流程
◆服务优势
1.高可信度图谱支撑：每个位点的氨基酸有超过十种不同的肽段支持，每个氨基酸在质谱里有强的离子片段峰证据。
2.完整抗体质量核对：进行重链和轻链的完整质量测定，以确认组装的抗体序列，包括N末端焦谷氨酸环化修饰，重链C末端赖氨酸丢失和N-连接的寡糖。
3.亮氨酸（L）和异亮氨酸（I）区分：1）EThcD中的w-ion检测、2）酶裂解选择性、3）同源性统计数据，以明确区分Leu / Ile残基。
图 | 利用 EThcD 谱中的诊断离子区别亮氨酸（L）和异亮氨酸（I）
图 | 利用胰凝乳蛋白酶或胃蛋白酶对亮氨酸（L）的优选选择性
图 | I/L 区分的三重验证
4.无需理论参比序列，并且可以直接对含有2个主要成分的多克隆抗体进行直接的从头测序分析。
◆应用领域
1.多肽药物、重组蛋白、单抗、双抗、多抗（n=2）、纳米抗体、Fab/Fc、交联抗体等未知蛋白的从头测序；
2.抗体药物研发以及生产过程的质控。
◆样品要求及交付标准
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送样要求 |
蛋白样品≥100 ug；纯度≥90%。 |
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项目周期 |
最快2个工作日 |
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交付标准 |
出具正式报告，报告实验过程、蛋白序列、二级图谱支撑、I/L区分列表。 |
◆案例分享
案例分析：左图是抗体样品从头测序实例，在没有参考序列情况下，经过 PEAKS AB 软件，使用 de novo 算法自动化组装后的序列，每一个氨基酸都有很多 de novo 肽段支持（红色部分），右侧是样品参考序列。可以发现左边组装序列重链 68-70 位氨基酸分别是TLS，而参考序列此处的氨基酸是 SIT，TLS 与 SIT 的分子量相同，但是 SIT 氨基酸是没有 de novo 肽段支持的。由此可见 de novo 算法是不仅仅区分分子量的，还可以根据多肽二级质谱图的碎片信息精确区分到每一个氨基酸。
抗体标准品重链序列
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文献和实验性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理（不超过15秒）再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理（不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理可能会影响后继的抗体识别
【资源】个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）
的机械强度和化学耐受性使PVDF膜在各种染色应用和多重免疫检测中成为理想选择；而且单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，特别是需要做N端蛋白测序，在相当“严酷”的清洗条件下，当尼龙或者硝纤膜已经降解的情况下PVDF膜依然保持本色，笑傲江湖。所以PVDF也是要做蛋白测序的唯一选择。但不适合荧光。PVDF膜特别注意的是需要100%甲醇预处理（不超过15秒）再用缓冲液平衡，才能用，而且适用过程中万一干了也要同样程序再处理（不过要真出现这种问题也是自己欠扁，谁要你不小心呢，转膜前处理也就罢了，转膜后再这样处理
组化和Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。一般抗体说明书上都有注明此种抗体识别的氨基酸区间。（限于单抗）W. Western Blot 中抗体的重复应用问解答：抗体工作溶液一般不主张储存反复使用，但是如抗体比较珍贵，可反复使用2－3次。稀释后应在2－3天内使用，4度保存，避免反复冻融。4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别？解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。就结合
