ThinCert插入式细胞培养小室，适用于6孔板，无菌，孔径

【资源】Western Blot 简略而细致

头拨正；若变形严重，可在去除残胶后用较薄的梳子再次插入梳孔后加水拔出。30min后即可上样，长时间有利于胶结构的形成，因为肉眼观的胶凝时其内部分子的排列尚未完成。 二．样品处理 1．培养的细胞（定性）： ⑴ 去培养液后用温的PBS冲洗2~3遍（冷的PBS有可能使细胞脱落）。 ⑵ 对于6孔板来说每孔加200~300μl，60~80℃的1×loading buffer。 ⑶ 100℃，1min。 ⑷ 用细胞刮刮下细胞后在EP管中煮沸10min，期间vortex 2~3次。 ⑸ 用干净

【资源】个人整理 Western Blot（步骤简略，但注意事项、经验总结、基本原理很全面）

左右）后滤纸贴角吸干，置于保鲜膜内固定于片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒，根据所见荧光强度曝光。取出胶片立即完全浸入显影液中1-2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定Marker，进行分析与扫描。2．AP-NBT/BICP显色法：每片NBT/BICP可溶解于30ml水中，使用前将一片分装在30个 EP管中，每张3×9cm的膜取一管配成1ml即可。将PBST或TTBS洗涤过的膜用去离子水稍加漂洗，滤纸贴角吸干，反贴法覆于NBT/BICP溶液液滴上，并用不透明物体（如报纸

各类细胞培养小结

素工作液；DAB工作液（武汉博士德公司）显色，自来水终止反应；脱水，透明，D·P·X封片保存。 2 结果 2.1 形态学观察结果 组织块24ｈ开始贴壁，48～72ｈ可见神经组织边缘游出少量细胞，主要为圆形或梭形（图1）。8～9d左右，细胞基本铺满培养孔。此时改用无血清条件培养基培养进行纯化。培养过程中，部分细胞死亡。12d左右获得的细胞胞体基本为呈圆形或多角型，直径约6～10μm。细胞核较大，胞质少（图2）。 2.2 免疫组织化学染色结果 培养的视神经少突胶质细胞的免疫组织化学染色GC蛋白