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- 2025年08月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
33
- 英文名：
Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）
- 保质期：
1年
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 保存条件：
2-8℃
- 规格：
96T
Test Kit for Antibodies to Foot and Mouth Disease Virus A（ELISA）
【包装规格】 96T×1/盒(注：酶标板不可拆)、96T×2/盒（注：酶标板一块可拆、一块不可拆）
【预期用途】 口蹄疫是由口蹄疫病毒（Foot and Mouth Disease Virus，FMDV）引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，其特征为口腔黏膜、蹄部、乳房皮肤发生水泡和烂斑。
本试剂用于检测牛、羊血清中口蹄疫 A 型抗体，可用于口蹄疫 A 型疫苗免疫效果评价。
【原 理】
本试剂盒系由预包被口蹄疫A型抗体的酶标板、抗体工作液、抗原液酶标记物及其他配套试剂组成，应用阻断酶联免疫法（ELISA）原理检测牛、羊血清样本中口蹄疫A型抗体。实验时将稀释的样本与抗原液同时加入酶标板中孵育，样本中的抗体与酶标板上的抗体竞争抗原，阻断抗原与板的结合；经洗涤后，再加抗体工作液孵育；经洗涤后加入酶标记物孵育；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫A型抗体。
【储存及有效期】 于 2～8℃避光保存，有效期为 12 个月。
包被板开封后请于 2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为 2 个月。
【适用仪器】 含 450nm、630nm 波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。
【样品准备】
1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品 1 周内可于 2～8℃保存，长期需置-20℃保存。
2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作 20 倍稀释。
3.用已稀释的洗涤液将待检血清按 64 倍稀释（如 5μl 血清加入 315μl 洗涤液中，混匀）。阴、阳性对照不用稀释。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温 30 分钟，恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条，设空白对照 1 孔、阴性/阳性对照各 2 孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照 50μl，样品孔每孔加入稀释后的样品 50μl；每孔再加入抗原液 50μl（空白孔除外）。
注：加入抗原后样本稀释比例相当于 1:128。
4.震荡混匀 10 秒，置 37℃反应 30 分钟。
5.扣去孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，重复洗涤 5 次，拍干。
6.每孔加抗体工作液 50μl（空白孔除外），置 37℃反应 30 分钟。
7.洗涤，同步骤 5。
8.每孔加酶标记物 50μl（空白孔除外），置 37℃反应 30 分钟。
9.洗涤，同步骤 5。
10.每孔依次加底物液 A、底物液 B 各 50μl，混匀，37℃避光反应 15 分钟。
11.每孔加终止液 50μl，混匀，用空白孔调零，于 450nm(可用 630nm 作参比波长）测定各孔吸光值（A 值）。
【参考值】 实验正常的情况下，阴性对照 A 值≥1.0，阳性对照 A 值≤50%×阴性对照 A 值。
【检验结果的解释】
1.PI（阻断率）=（1-样本 A 值/阴性对照孔平均 A 值）×100%，PI≥50%为阳性；PI＜50%为阴性。
2.本实验检测结果为阳性时表明待检样本中含有口蹄疫 A 型抗体，且效价高于 1:128，达到保护水平。
3.本实验检测结果为阴性时表明待检样本中不含有口蹄疫 A 型抗体，或效价低于 1:128，未达到充足保护水平。
4.如需了解样本抗体的最终效价，可将样本进行梯度稀释，使 PI≥50%的最高稀释比例即为该样本抗体的最终效价。
【试验方法的局限性】
该试验仅作为定性牛、羊血清中口蹄疫 A 型抗体，根据 PI 值高低可作抗体水平强、中、弱的粗略评估。
【注意事项】
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
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文献和实验：分别是竞争性蛋白质结合分析法[3]、放射性免疫分析法[4]和薄层色谱法[5]。在80年代，放射性免疫分析法得到了广泛的应用和改进，由于这种方法采用放射性核素标记，应用范围受到一定限制，为了进一步提高检测的灵敏度和操作的安全性，进入90年代又陆续发明了各种酶标记法和化学发光法的竞争性ELISA检测试剂盒，这一类检测方法的根本原理都是基于抗体抗原的免疫反应，所有这些试剂盒中采用的抗体全部是兔抗血清或者是经过特异亲和提纯之后的抗cAMP或cGMP的兔多抗，毫无疑问，兔多抗在约四十年的cAMP，cGMP定量
和***）被用来治疗ED（勃起功能障碍）；腺苷酸环化酶将ATP催化生成cAMP，cAMP可以被磷酸二酯酶水解成ADP。激活腺苷酸环化酶和抑制磷酸二酯酶可以增加细胞内cAMP的含量。腺苷酸环化酶激活受体的阻断剂和cAMP特异性磷酸二酯酶的抑制剂被用来治疗人类的某些疾病，比如针对升高cAMP水平的b-肾上腺素受体的阻断剂被用于治疗心律失常、高血压、心肌梗塞和心力衰竭等疾病。 在五十年的研究历程中，从开始研究cAMP，cGMP在各种生理过程中的调节作用，到近几年与之相关的药物研发，药物筛选领域
任何一种病原体，包括细菌、病毒和寄生虫，在其对宿主侵入或致病过程中，病原体本身的蛋白质成分(ligand)需要首先与宿主细胞上的受体(receptor)相互识别连接。如口蹄疫病毒需要借助于受体细胞上的Heparan sulfate受体，并与其相互作用后才能侵入细胞内；巴贝斯虫裂殖子需借助于宿主的补体作为桥梁，才能与红细胞结合并最后侵入红细胞内。对病原体与宿主受体相互作用成分的特性与功能分析，是制订免疫预防措施及制备阻断药物的前提。phage display法是克隆病原体ligand的一种最为理想的手段
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