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- 2025年08月08日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
上海晅科生物科技有限公司
- 库存：
100
- 样本：
血清，血浆及相关液体样本
- 标记物：
辣根酶
- 适应物种：
/
- 应用：
科研
- 检测方法：
酶联免疫法
- 检测范围：
详询
- 规格：
48T/96T
一、原理及用途：
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样品中的黄曲霉/毒素B1（Aflatoxin B1，AFB1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的黄曲霉/毒素B1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗黄曲霉/毒素B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含黄曲霉/毒素B1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中黄曲霉/毒素B1的残留量。
二、试剂盒组成
酶标板……………………………96孔
标准液（黑盖）：各1ml
0ppb、0.02ppb、0.06ppb、0.18ppb、0.54ppb、1.62ppb
高标准液：100ppb…………………1ml
酶标记物（红盖）…………………5.5ml
抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml
底物液A（白盖）……………………6ml
底物液B（黑盖）……………………6ml
终止液（黄盖）………………………6ml
20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml
说明书…………………………………1份
三、需要的器材和试剂
3.1 仪器：酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）
3.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl
3.3 试剂：甲醇、正己烷、三氯jia烷或二氯/甲烷
四、酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。
实验开始前，用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
4.1 编 号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4.2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。
4.3 洗 涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。
4.4 显 色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。
4.5 终 止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。
4.6 测吸光值：用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成。
五、结果分析
5.1 百分吸光率的计算
标准液或样本的百分吸光率等于标准液或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即
| 百分吸光度值（%）＝ | A | ×100% |
| A0 |
A—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb标准溶液的平均吸光度值
5.2 标准曲线的绘制与计算
以标准液百分吸光率为纵坐标，对应的标准液浓度（ppb）的对数为横坐标，绘制标准液的半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中待测物的实际浓度。
若利用试剂盒专业分析软件进行计算，更便于大量样本的准确、快速分析。
六、贮藏及保存期
储藏条件：试剂盒于2-8℃保存，避免冷冻。
保 质 期：该产品有效期为1年，生产日期见包装盒。
七、技术指标
7.1 试剂盒灵敏度：0.02ppb(ng/ml)
7.2 反应模式：25℃，30min～15min
7.3 检测下限：
谷物……………………………………0.1ppb
配合饲料………………………………0.2ppb
食用油、花生…………………………0.4ppb
酱类、麦类等饲料……………………0.2ppb
啤酒……………………………………0.2ppb
葡萄酒、酱油、醋……………………0.1ppb
7.4 交叉反应率：
黄曲霉/毒素B1…………………………100%
7.5 样本回收率：
谷物及配合饲料……………………85%±15%
花生…………………………………82±15%
食用油………………………………85±15%
酱类、麦类等饲料………………83±15%
啤酒………………………………84±15%
葡萄酒、酱油、醋………………87±15%
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文献和实验应用超高压液相-质谱联用技术同时测定花生及其制品中的六种黄曲霉毒素
2+G1+G2)。因此，研究一种新的高灵敏度、高选择性的同时测定黄曲霉毒素的检测方法，对于食品的安全性检测和食品的质量控制具有十分重要的意义。 现在应用比较广泛的黄曲霉毒素的检测方法主要有：薄层色谱法（TLC）[4]、高效液相色谱法（HPLC）[5]、二维薄层色谱法[6]、酶联免疫吸附测定法（ELISA）[7]等。薄层色谱法操作繁琐、污染大、定量差、耗时长；而酶联免疫法虽操作简单、灵敏度高，但特异性差。普通的HPLC结合荧光检测的方法，黄曲霉毒素需要经过衍生化以后才能进行测定，操作烦琐，分析
进行检测，采用配对t检验法比较两种方法的检测结果是否存在显著性差异。经计算，四个项目的液相色谱参考值与 ROSA 测定值之间均无显著差异。以高效液相色谱法的测定结果作为认定值，将 ROSA 快速测试条的测定结果与之比较，按正确度（%）=检测值/认定值×100% 计算，黄曲霉毒素 B1、呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A 的平均准确度分别为 99%、106%、117% 和 95%，准确度均在粮油检测行业标准规定的范围内。总结而言，Charm Rosa 霉菌毒素检测系统具有以下特点。首先前处理简单
1.筛选法 利用机械或人工的方法先对饲料进行筛选，剔除霉变饲料；然后将未霉变的饲料进一步干燥，以达到去霉防霉变的目的。 2.漂洗法 对玉米、大豆等颗粒状原料，用清水漂洗或用2%石灰水进行反复漂洗，即能去除霉菌毒素。 3.热处理法 对于饼粕类原料，在150℃的温度下焙烤30分钟或和微波加热8～9分钟，可使48%～61%的黄曲霉毒素
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