大鼠骨髓中性粒细胞丨大鼠原代细胞丨逸漠(immocell)

产品基本信息

细胞名称：大鼠骨髓中性粒细胞

种属来源：大鼠

组织来源：骨髓

细胞形态：圆形细胞

生长特性：贴壁生长

培养基:： 专用培养基

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:3，每周2- 3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

注意：大鼠骨髓中性粒细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

细胞简介：大鼠骨髓中性粒细胞分离自骨髓;白细胞是一类无色、球形、有核的血细胞。根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞 ，其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同，分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种。中性粒细胞是在瑞氏(Wright)染色血涂片中，胞质呈无色或极浅的淡红色 ，有许多弥散分布的细小的(0.2～0.4um)浅红或浅紫色的特有颗粒。细胞核呈杆状或2 ～5分叶状，叶与叶间有细丝相连。中性粒细胞是人体内寿命最短的细胞，一般体外培养12-24h内活性稳定，48h活性下降。

细胞培养操作

大鼠骨髓中性粒细胞是一种悬浮细胞，细胞形态呈圆形，在标准操作流程下，细胞不增殖;不传代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。

1)复苏细胞：将含有1 mL大鼠骨髓中性粒细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有大鼠骨髓中性粒细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将大鼠骨髓中性粒细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查大鼠骨髓中性粒细胞密度。

2)细胞传代：如果大鼠骨髓中性粒细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将大鼠骨髓中性粒细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待大鼠骨髓中性粒细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使大鼠骨髓中性粒细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

特别注意事项：此细胞为悬浮细胞，请注意不要直接倒掉，造成损失;悬浮细胞因多数胞体较小，离心收集时，请注意悬液中细胞是否收集完全，可适当加大离心转速200转或增加离心时间3-5mi n，增加细胞获取量。