石蜡包埋组织RNAOUT

产品名称：石蜡包埋组织 RNAOUT
英文名称：PET RNAOUT
产品及特点：石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般 都比较长，很不容易从中提取到可以进行 PCR 的 RNA，存在的主要问题是 RNA 的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包 埋组织中快提 RNA（包括miRNA）的试剂，具有下列特点：
1. 一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品 RNA 的丢失。
2. 含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
3. 能有效去除基因组 DNA 的污染，得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR 反应。
4. 即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。
5.本产品仅供科研。
规格及成分：

成 份	30 次包装
溶液 A	30 mL
溶液 B	3 mL
溶液 C	5 mL
溶液 D	15 mL
微量核酸沉淀剂	30 mL
RNase-free 水	10 mL
使用手册	1 份

运输及保存：低温运输，4℃保存（溶液 C 需要-20℃放置），有效期一年。
自备试剂：氯仿、75%乙醇。
使用方法：
1. 将 5 片厚度为 6-8 um 的石蜡包埋组织切片转移到 1.5 mL 塑料离心管(最好 使用螺旋盖离心管)中并加入 1 mL 溶液 A，在振荡器上以最大速度振荡 10 秒。
2. 加入 75 uL 溶液 B，在振荡器上以最大速度振荡 10 秒。
3. 7000×g 室温离心 2 分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。
4. 小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空抽干机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6. 加入 150 uL 溶液 C，55℃保温过夜。
7. 短暂离心，95℃保温 10 分钟。
8. 加入 0.5 mL 溶液 D，充分震荡半分钟。
9. 加入 0.1 mL 自备氯仿，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
10. 13000-5000×g 室温离心 3-5 分钟。
11. 将上清液（约 0.6 mL）转移到另一干净的 1.5 mL 塑料离心管中。下层有机 相（蓝色）和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢 进行，否则容易吸出交界面的不可见的 DNA。
12. 在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡 30 秒混匀。
13. 13000-15000 g 室温离心 5 分钟，离心底的侧面将形成 RNA 沉淀。如果需 要提高 RNA 回收率，可以将离心时间延长到 20 或 30 分钟。
14. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。
15. 在含 RNA 沉淀的离心管中加入 1mL 自备的 75%乙醇，振荡混匀 30 秒。
16. 13000-15000 g 室温离心 1 分钟。
17. 小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA 沉淀。
18. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约 50 uL)。注意不要吸弃沉淀。 此步十分重要，否则残留的乙醇会影响 RNA 的使用。
19. 室温放 1-2 分钟后立即加入 50-100 uL RNA 溶解液使 RNA 沉淀溶解。千万 不要用真空离心法使 RNA 沉淀过于干燥，否则 RNA 将变得十分难溶。样品立 即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA 完整性的电泳检测：
21. RNA 产量产率测定：将 5-10 μL RNA 溶于 TE 缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检 测其在 OD260 的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA 浓度（1 OD260 的 RNA=40 μg/mL），进而计算出 RNA 的产量（浓度×体积)和产率(RNA 产量/ 组织用量)。
22. RNA 纯度测定：无污染的总 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之间(具 体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品 可能有蛋白质污染，但一般不影响 RT-PCR 等反应。