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- 爱必信(absin)
- abs50056
- 上海
- 2025年07月11日
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现货
- 英文名：
Calcein-AM/PI Double Stain Kit,Calcein-AM/PI
- CAS号：
-
- 保质期：
-20℃ 避光干燥保存，有效期12个月。
- 供应商：
爱必信(上海)生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃ 避光干燥保存，有效期12个月。
- 规格：
500T
| 产品描述 | |||||||||||||||||
| 描述 |
Calcein-AM是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，发绿色荧光（Ex=490nm, Em=515nm）。因其在传统的Calcein（钙黄绿素）基础上引入乙酰甲氧基甲酯（AM）基团，增加了疏水性，使其能够轻易穿透活细胞膜。一旦进入细胞后，Calcein-AM（本身不发荧光）被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子Calcein，从而被滞留在细胞内并发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM 和CFDA)相比，由于Calcein, AM 细胞毒性极低，是最适合用于活细胞染色的荧光探针，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。
由于死细胞缺乏酯酶，Calcein-AM 仅用于对活细胞的细胞生存能力测试和短期标记。因此，Calcein-AM常常与死细胞荧光探针如碘化丙啶（PI）等联合使用，同时进行活细胞和死细胞的荧光双重染色。碘化丙啶（Propidium iodide，PI）不能穿过活细胞的细胞膜，仅能穿过死细胞膜的无序区域而到达细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋从而产生红色荧光（Ex=535 nm, Em=617 nm），因此PI 仅对死细胞染色。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。而用545nm激发，仅可观察到死细胞。 本试剂盒的工作原理就在于Calcein-AM和PI的双重染料，来进行活细胞和死细胞的双重染色标记，从而进行活细胞和死细胞水平的分析。根据我司优化的实验体系，单次就200μl 细胞悬液进行染色，可以做500次检测。 产品组分：
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| 使用方法 |
一、工作液的配制：
1、1×Assay Buffer（反应缓冲液）的配制 从低温冰箱内取出10×Assay Buffer，根据单次用量无菌条件取出适量，用去离子水（dH2O）做10 倍稀释以得到1×Assay Buffer。 2、1×染色工作液的配制 （1）先将低温保存的Calcein-AM 溶液(2mM)和PI 溶液（1.5mM）回到室温20-30min。 注意：第一次使用可对母液进行分装，以减少反复冻融次数。 （2）取5μl Calcein-AM 溶液(2mM)和15μl PI 溶液（1.5mM）加入5ml 1×Assay Buffer，充分混匀。此时得到Calcein-AM 的工作液浓度为2μM，PI 的工作液浓度为4.5μM。由于不同细胞系的最佳染色条件不同，初次实验建议做梯度实验，以确定Calcein-AM 和PI 的最适浓度。梯度筛选的原则为使用最低的探针浓度得到较好的荧光结果。 注意：由于Calcein-AM 的稳定性比较差，此染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。 二、染色步骤： 1、对于贴壁细胞，先用细胞刮刀或者胰酶-EDTA消化细胞，之后离心收集细胞（1000rpm，3min）。对于悬浮细胞，直接离心（1000 rpm，3min）收集细胞。 2、去上清，用1×Assay Buffer 充分清洗细胞2~3 次，以充分去除残留的酯酶活性。 3、用1×Assay Buffer 制备细胞悬液，使其密度为1×105~1×106 细胞/ml。 4、 取100μl 染色工作液加入200μl 细胞悬液内，混匀，37℃孵育15min。 注意：如果需要，可延长孵育时间至30min。 5、荧光显微镜下使用490±10 nm 激发滤片同时检测活细胞（黄绿色荧光）以及死细胞（红色荧光）。另外，使用545nm 的发射滤片仅能观察到死细胞。也可以直接在荧光酶标仪下使用合适的滤片进行检测。 注意：可以使用以下方法来优化得到两种荧光染料的最佳工作浓度。 （1）用0.1%皂素或者0.1-0.5%digoxin孵育细胞10min，或者用70%乙醇孵育细胞30min，从而制备死细胞； （2）用0.1-10μM 的PI 溶液进行死细胞染色，以得到仅仅对细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。 （3）用0.1-10μM 的Calcein-AM 进行死细胞染色，以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色，去观察是否活细胞能被染色。 |
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| 注意事项 |
1、由于Calcein-AM 对湿度非常敏感，若是Calcein-AM 溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。Calcein-AM 工作液必须现配现用。
2、碘化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作时一定要注意防护。若接触到皮肤，需要立即用自来水清洗。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 |
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| 基本信息 | |||||||||||||||||
| 别名 |
Calcein-AM/PI
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| 储存/保存方法 |
-20℃ 避光干燥保存，有效期12个月。 |
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文献和实验，然后第二天用 NucView 550 (Biotium) 施用不同浓度的星形孢菌素（STS）。NucView 550 是 caspase-3 荧光探针，死细胞核用红色荧光染色。用 STS 和 NucView 550 处理后，将 HT-29 微球用 4% 多聚甲醛固定并用 0.5%Triton X-100 / PBS（-）通透性处理。微球的细胞核在 4°C（39.2°F）下用 Hoechst 33342 过夜染色。染色后，用 SCALEVIEW-S4 将微球透明化。 成像和分析 我们使用 FV
及中红外仍有较强光谱强度3）能量较强更易到达物镜后孔径此类产品：XBO75W，100W氙灯；寿命一般400小时，1200小时3、金属卤素灯目前各大显微镜品牌广泛使用的一种光源，它和汞灯的激发光谱很像，但它和显微镜以光纤相连，能散热，寿命更长。光纤从光源连到显微镜上，可以大量减少光产生的热能。金属卤素灯对活细胞成像的另一个优势是内置强度设计装置，可以容易调节激发光。也可以通过选择直接连接获得更好的激发效果。例如：EXCELITAS公司X-cite光源，120W，适用于各大厂家高端荧光显微镜；寿命2000
科研打工人的福音！Nature报道这项新技术，你以后再也不用做荧光染色了
M. Christiansen et al. 2018） 伊利诺伊大学香槟分校，物理学家 Gabriel Popescu 正在使用深度学习来回答一个最基本的显微镜问题： 细胞是活的还是死的？这比听起来要难的多，因为测试需要用有毒的化学物质。Popescu 和他的同事们称他们的方法为 PICS（phase imaging with computational Specificity）。他们在活细胞中使用这种技术来识别细胞核和细胞质，然后每天计算细胞的重量。与获取图像并训练机器随后进行处理不同
