小鼠主动脉血管平滑肌细胞

产品基本信息

细胞名称：小鼠主动脉血管平滑肌细胞

种属来源： 小鼠

组织来源：血管平滑肌

细胞形态：成纤维细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:： 专用培养基

生长条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%

温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%

传代方法：1:2，每周 2次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mL小鼠主动脉血管平滑肌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有小鼠主动脉血管平滑肌细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将小鼠主动脉血管平滑肌细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查小鼠主动脉血管平滑肌细胞密度。

2)细胞传代：如果小鼠主动脉血管平滑肌细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将小鼠主动脉血管平滑肌细胞悬液按1:2比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待小鼠主动脉血管平滑肌细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使小鼠主动脉血管平滑肌细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。