266-6细胞丨266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞

产品基本信息

细胞名称：266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞

种属来源：小鼠

组织来源：胰腺

细胞形态：上皮细胞样

生长特性：贴壁生长

培养基:： DMEM+10%FBS+PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

传代方法：1:2至1:4，每周2-3次

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

支原体检测：无

注：细胞贴壁性差，该细胞生长需要用到0.1% 的明胶包被的培养瓶或使用Corning的cellbind细胞培养瓶,货号是3289 ,补液的时候不要冲刷到细胞层，2-3天换液，80%以上汇合度传代。

细胞培养操作

1)复苏细胞：将含有1 mL266-6细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有266-6细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将266-6细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL完全培养基，培养过夜)。第三天换液并检查266-6细胞密度。

2)细胞传代：如果266-6细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b、加入0.25%Trypsin-0.02% EDTA消化液于培养瓶中(T25瓶1-2ml，T75瓶2-3ml)，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 -3min(难消化的细胞可以适当延长消化时间)，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加3-4ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心3 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

c、将266-6细胞悬液按1:2至1:4比例分到新的含6-8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

3)细胞冻存：待266-6细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;

a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使266-6细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c、将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。