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细胞划痕实验技术服务
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伊莱博生物科技(上海)有限公司
细胞实验技术服务
1实验原理◆划痕实验
人为地在融合的单层细胞上制造一个空白区域,边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合,又名伤口愈合实验(Wound-Healing Assay)
细胞划痕实验是目前测定细胞迁移运动与修复能力的最常用也是最简单的方法,科研中常常用来观察某外源因素对细胞迁移影响。
2实验分组
空白组:未做处理的细胞
用药物溶剂处理的细胞或者转染质粒对照的细胞
用药物处理的细胞或者转染目的基因的细胞
3实验步骤
用marker笔在六孔板底部画平行线,平行线之间的距离0.5cm,为了保证后续拍照位置是相同的;
标记六孔板
铺板
细胞重悬铺板,密度控制在第二天长满,若过夜后细胞完全长满,也可以适当延长培养时间,但如果细胞密度已经很大,尽量重新铺板,因为可能过一天后细胞太满,会导致细胞状态逐渐变差,后续细胞可能不迁移而是凋亡;
制造划痕
第二天用直尺比着使用10ul枪头制造划痕,划痕方向与标志线垂直,最好保持力度一致,尽量一次性划完,然后PBS冲洗3次,洗去漂浮的细胞
为了减少细胞增殖所引起的假阳性结果,降低细胞增殖对实验结果的影响,将完全培养基换成无血清培养基和低血清培养基(FBS<2%继续培养细胞);
拍照
拍照前最好用PBS冲洗3次,一般认为24h为细胞的一个周期,所以检测时间最好不要超过一个周期的时间,按照6孔板背后画线的垂直方向划痕,
选择合适时间点拍照,如0h,6h,12h,24h后取出细胞于显微镜下拍照。
数据处理与绘图:
使用image j分析每个时间点划痕的宽度或划痕的面积。
使用image pro plus 可以测量划痕位置的面积和高度,将面积除以高度可以得到平均的划痕宽度,将0 点的划痕宽度减去实验结束时的划痕的宽度,得到的就是细胞迁移的距离,然后使用距离值按如下公式进行计算migration index。
计算公式如为:migration index=migration distance of test group/migratance distance of control group
将3 次独立重复的数据都分析完后进行统计分析并绘制柱状图。
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