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MedChemExpress LLC
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产品分类
荧光定量PCR (qPCR)
MCE 国际站:Real-Time PCR
品牌:MedChemExpress (MCE)
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文献和实验一般来讲,进行real-time qPCR MasterMix都是2×的浓缩液,只需要加入模板和引物就可以。由于real-time qPCR灵敏度高,所以每个样品至少要做3个平行孔,以防在后面的数据分析中,由于Ct相差较多或者SD太大,无法进行统计分析。通常来讲,反应体系的引物终浓度为100-400mM;模板如果是总RNA一般是10ng-500,如果cDNA,通常情况下是1ul或者1ul的10倍稀释液,要根据目的基因的表达丰度进行调整。当然这些都是经验值,在操作过程中,还需要根据所用
荧光定量 PCR 的常见异常结果除了扩增曲线异常、融解曲线异常两类常见情况外,qPCR 实验中通常还会遇到以下三大类情况: 1. 复孔间重复性差怎么办? 复孔间重复性差一般会有以下两种情况: (1)CT 值很大,如 CT≥ 30,重复性差属于正常现象。该现象符合泊松分布,即在有效模板量很少的情况下,模板与引物的碰撞存在随机性,直接导致复孔间的 CT 值差异较大。 解决方法:如果融解曲线没有杂峰,无模板阴性对照同目的基因的 △CT 值为 3 or 5 以上,那 CT 值为准确的,可多设置
为大家介绍qPCR引物设计的相关原则,并详细讲解靶基因序列检索以及常用引物设计软件,最后和大家分享qPCR引物实验验证,更多干货与你分享!
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