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武汉华美生物工程有限公司
杆状病毒-昆虫细胞表达与纯化服务
根据实际服务情况来定价
杆状病毒-昆虫细胞表达系统(BEVS)属于真核表达系统的一种,该表达系统具有较高的安全性,并且基因组比较大,可以插入较大的外源基因,在大分子量的蛋白表达方面具有很大优势。并且具有完备的翻译后加工修饰和高效表达外源基因的能力。该系统由转移载体、杆状病毒载体和宿主细胞组成。该系统采用一个或多个杆状病毒的超强启动子,将外源目的基因插入到启动子后,获得重组病毒,这种重组病毒在昆虫细胞复制的同时,使外源基因得到高效表达。BEVS被广泛应用于病毒疫苗开发(如流感病毒和HPV疫苗开发)、信号蛋白制备、细胞因子制备、激酶开发等方面。
注:该无风险定制蛋白服务仅适用于800个氨基酸以内的蛋白质。如果您需要表达超过800个氨基酸的蛋白质,我们将按步骤收费。
步骤 | 服务项目 | 服务说明 | 华美生物特色 | 周期 | |
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1 | 质粒构建
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密码子优化全基因合成 | 多载体优化 为了提高表达成功率以及获得更高表达量,进行多信号肽优化,在确保纯度的同时更大程度保证了蛋白的活性。 |
5-10工作日 | |
PCR扩增产物通过酶切连接到pFastbac1等载体上 | |||||
转化TOP10宿主 | |||||
获得测序正确的重组质粒 | |||||
2 | 重组Bacmid及高滴度病毒制备
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转化DH10Bac构建重组Bacmid,PCR鉴定,提取Bacmid。 | 悬浮转染 悬浮转染方式大大提高了蛋白表达量,有效缩短实验周期 |
12-15工作日 | |
重组Bacmid转染昆虫细胞,得到P0代病毒,电泳检测表达量,如有需要再将P0代病毒感染细胞得到P1-P2代病毒 | |||||
3 | 扩大表达与纯化
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P1或p2代病毒感染昆虫细胞 | 优化表达 经过优化后,通过一步转染培养最快5天内即可得到大量的目的蛋白,低代数的病毒毒液感染细胞即可得到大量目的蛋白 |
5-10工作日 | |
通过亲和、离子交换、疏水及分子筛等多种层析方法纯化目的蛋白 | |||||
4 | 其他(可选)服务
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收费 | 酶切去除标签服务 | 灵活的附加服务 提供多种附加服务,客户可根据实验需求灵活选择 |
3个工作日 |
免费 | 可提供无菌操作、内毒素去除和冻干等服务(备注:冻干与无菌操作不可同时满足) | 2个工作日 | |||
5 | 质控
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进行纯度、浓度等检查,并提供QC报告 | 报告详细 为每个项目提供产品说明书及完善的质控报告 |
3-5工作日 | |
总时间 | 25-40工作日 |
● pFastbac1-KHM载体+sf9细胞高效表达
采用杆状病毒-昆虫细胞表达系统,该蛋白得到高效表达,细胞裂解液经过SDS-PAGE检测即可看到明显条带,经过纯化后检测,该蛋白表达量高达20mg/L。
蛋白纯化图
泳道1:上样后的穿透液
泳道2:细胞裂解液
泳道3:Marker
泳道4:30 mM咪唑洗脱液
泳道5:60 mM咪唑洗脱液
泳道6:250 mM咪唑洗脱液
该项目目的蛋白较大,客户选择基因合成,载体构建,bacmid构建及后期的蛋白表达纯化均在我公司完成,最后该蛋白成功在sf9细胞中表达,表达量达到5mg/L,纯度达到95%,客户收到该蛋白经过验证后,对我们的产品质量非常满意。
蛋白纯化图
泳道1:60 mM咪唑洗脱
该蛋白分子量比较小,表达难度较高,采用我公司的pFastBac1-MBP载体进行融合表达后,融合蛋白成功表达,后经过酶切和二次纯化后,目的蛋白纯度达到95%。
蛋白纯化图
泳道1:融合蛋白酶切前
泳道2:融合蛋白酶切后
泳道3:二次纯化后
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