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伊莱博生物科技(上海)有限公司
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分子生物学技术服务
伊莱博生物拥有丰富的研究经验,具备完善的系统化管理能力和科研服务体系。目前已自建细胞、分子、病理等实验平台近1000平方米,拥有先进的仪器设备、细胞库、样本保存库等。动物实验中心近1800平方米,可满足同时饲养清洁级和SPF级动物。核心实验技术团队主要来自中国科学院大学、复旦大学、上海交通大学等重点高校及科研机构,能够为客户提供研究方案策划、项目实施及项目深度分析等方面的技术支持。公司目前参与研究项目已经涵盖心脑血管、肿瘤、内分泌、生殖、免疫、神经等诸多领域。
慢病毒(Lentivirus)是逆转录病毒的一种。构建的siRNA / miRNA慢病毒载体,与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的普通siRNA载体相比,一方面可以扩增替代瞬时表达载体使用,另一方面,Lentivirus-siRNA克隆经过慢病毒包装系统包装后,可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞系如原代细胞、悬浮细胞和处于非分裂状态的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达。
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文献和实验一、试剂准备 1、Cas9 过表达慢病毒载体选择。 货号 名称 CR2001 pLV-Cas9-Puro CR2002 pLV-Cas9-Neo CR2003 pLV-Cas9Nick-Puro CR2004
要保护好自己,需要生物安全柜(往里吹风最好),或者超净台(把风给关了 (*^__^*))。(下图是慢病毒构建载体示意图)病毒来了,需要分装,-80 保存,反复冻融影响病毒活性,一般情况系,我是将病毒分成 10 ul 一管。其次是看清你自己的病毒情况,是荧光标记(一般 GFP),还是非荧光标记 (一般标签蛋白是过表达是 Flag,敲降是 scramble)。元元做的是肿瘤相关实验,所以咱们这里讲的是贴壁的肿瘤细胞的稳转,一定注意,元元讲的是普适的方法,一定要看厂家的说明书。一般先用带有 GFP 荧
作为细胞生物学专业的博士生,在基因功能研究上已经有五年的经验了,今天我给大家讲讲其中经常用到并且非常重要的一种技术--慢病毒包装的过表达体系。下面我就从引物设计,慢病毒表达质粒构建等方面详细讲述。下面以 plex-MCS 载体为例。1. 选择酶切位点,为了避免移码突变,上游的酶切位点选择起始密码子 ATG 前面的 spel,下游选择 xho1。2. 构建方法的选择。连接法对于连接法,首先设计引物将目的基因 PCR 出来,即酶切位点加基因引物,此时应注意,为了防止酶切将基因破坏,通常习惯在两端
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