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GST标签蛋白琼脂糖纯化树脂-
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辉骏生物
1000
Glutathione Agarose Resin
GST标签蛋白琼脂糖纯化树脂
具体价格联系辉骏生物:4006991663
(GST标签蛋白琼脂糖纯化树脂)
GST标签蛋白琼脂糖纯化树脂是一种将还原型谷胱甘肽(Glutathione)键合在琼脂糖微球上形成的亲和层析分离介质。该产品保留了天然多糖化合物极好的亲水性及大网架结构,与生物活性大分子有很好的相容性,具有高动态吸附容量,快流速操作等特点,用于谷胱甘肽转移酶标记蛋白(GST 融合蛋白)、谷胱甘肽转移酶(GST)和谷胱甘肽依赖蛋白的分离纯化。
1. 样本准备(以大肠杆菌表达的蛋白纯化为例)(1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。(2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000 rpm,离心15 min,收集菌体,然后加入菌液体积1/10的裂解缓冲液(添加PMSF,终浓度为1 mM),也可同时加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。(3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1 mg/mL。注:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。(4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10 µg/mL RNase A和5 µg/mL DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。(5)收集上述澄清蛋白液至离心管中,10000 rpm,4℃离心20~30 min。取上清,置于冰上备用或 - 20℃保存。
2. GST标签融合蛋白纯化(1) 根据蛋白表达量取适量体积的 GST纯化树脂至尖底离心管中,加入5倍树脂体积的漂洗缓冲液,颠倒混匀30次,500 g离心5 min,弃上清。(2) 重复漂洗一次,500 g离心5 min,弃上清。(3) 向树脂中加入含GST融合蛋白的大肠杆菌裂解液(总体积不要超过离心管体积的2/3),放混匀仪上4 ℃孵育2~4 h。(4) 4 ℃ 500 g离心5 min,弃上清。(5) 加入10倍树脂体积漂洗缓冲液,颠倒混匀30次,4 ℃ 500g离心5 min,弃上清;重复该漂洗操作两次,500 g离心5 min,弃上清。
3. 洗脱(1) SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法(变性洗脱法):得到的蛋白样品适合SDS-PAGE电泳或Western Blot检测。加入50 μL 2×SDS-PAGE上样缓冲液,95ºC加热5分钟。4 ℃ 12000 g离心 5 min,收集上清至新的离心管中。(2) 非变性洗脱法:洗脱后的蛋白保持原有的生物活性,便于后续检测(例如SDS-PAGE、Western-blot、质谱实验等)。每10 μL树脂,加入10 μL洗脱缓冲液,涡旋震荡20 s,放混匀仪上室温洗脱10~15 min,涡旋震荡20 s;4 ℃ 12000 g离心 5 min,收集上清至新的离心管中,- 80℃保存或直接用于后续实验。
1. 本产品仅限于科学研究使用,不得用于临床诊断或治疗。2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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