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- Solarbio
- 北京
- BC2995
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
2-8°C
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Soil Nitrite Reductase（S-NiR）Activity Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC2995-100T/48S
- 规格：
100管/48样
土壤亚硝酸还原酶（S-NiR）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC2995
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 试剂一 |
粉剂×1支 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
粉剂×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂三 |
粉剂×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂四 |
液体15mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂五 |
液体15 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 标准品 |
液体1mL×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂一：临用前加入1mL蒸馏水充分溶解，2-8℃保存2周。临用前根据用量用蒸馏水稀释100倍，现用现配；
2、 试剂二：临用前加15mL蒸馏水备用，2-8℃保存2周；
3、 试剂三：临用前加15mL蒸馏水溶解，此溶液为饱和溶液，取上清使用即可。用不完的试剂2-8℃保存2周；
4、 标准品：10μmol/mL 亚*标准液。
产品说明：
土壤亚硝酸还原酶（Solid-Nitrite reductase，S-NiR）是反硝化作用中的关键酶之一，它是由土壤反硝化细菌产生的一种还原酶类，可将NO2-还原为NO，它的活性反映了生物降解过程中氮素的转化效率，为氮素转化规律的研究提供一定的依据。
亚硝酸还原酶可将NO2-还原为NO，使样本中参与重氮化反应生成紫红色化合物的NO2-减少，即540nm处吸光值的变化可反应土壤中亚硝酸还原酶的活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、30-50目筛、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
新鲜土样自然风干或37℃烘箱烘干，过30-50目筛。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 标准液的稀释：将标准液用蒸馏水稀释至0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL的标准液。
| 序号 |
稀释前浓度（µmol/mL） |
标准液体积（µL） |
蒸馏水体积（µL） |
稀释后浓度（µmol/mL） |
| 1 |
10 |
100 |
900 |
1 |
| 2 |
1 |
160 |
40 |
0.8 |
| 3 |
1 |
120 |
80 |
0.6 |
| 4 |
1 |
200 |
300 |
0.4 |
| 5 |
0.4 |
200 |
200 |
0.2 |
| 6 |
0.2 |
200 |
200 |
0.1 |
| 7 |
0.1 |
200 |
200 |
0.05 |
备注：实验中每个标准管需100µL标准溶液。
3、 样本测定：
| 试剂名称 |
无基质管 |
空白管1 |
对照管 |
测定管 |
标准管 |
空白管2 |
| 风干土样（g） |
- |
- |
0.05 |
0.05 |
- |
- |
| 蒸馏水（μL） |
- |
100 |
100 |
- |
- |
- |
| 试剂一（μL） |
100 |
- |
- |
100 |
- |
- |
| 试剂二（μL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
- |
- |
|
|
充分混匀后，25℃水浴准确反应3h |
- |
- |
|||
| 试剂三（μL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
- |
- |
|
|
旋涡震荡30s，10000rpm，4℃，离心10min |
- |
- |
|||
| 上清液（μL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
- |
- |
| 标准品（μL） |
- |
- |
- |
- |
100 |
- |
| 试剂四（μL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
| 试剂五（μL） |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
100 |
| 蒸馏水（μL） |
- |
- |
- |
- |
- |
100 |
| 充分混匀，室温放置15min后吸取200μL于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定540nm各管吸光值，分别记为A无基质管、A空白管1、A对照管、A测定管、A标准管和A空白管2，计算ΔA测定=（A无基质管-A空白管1）-（A测定管-A对照管），ΔA标准=A标准管-A空白管2（标准曲线、无基质管、空白管1、空白管2只需做1-2次）。 |
||||||
三、S-NiR计算
1. 标准曲线的绘制：
根据标准管的浓度（x，μmol/mL）和吸光度ΔA标准（y，ΔA标准），建立标准曲线。根据标准曲线，将ΔA测定（y，ΔA测定）带入公式计算样本浓度（x，μmol/mL）。
2. S-NiR的计算：
酶活单位定义：每g土样每天还原1μmol NO2ˉ的量为一个酶活力单位。
S-NiR（U/g 土样）=x×V反应÷W÷T=2.4×x÷W
T：反应时间，3h=1/8d；V反应：反应体系体积，0.3mL；W：土样质量，g。
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文献和实验|
AuthorJing Yang, Guojun Liu, Haiyan Tian, Xin Liu, Xingyu Hao, Yuzheng Zong, Dongsheng Zhang, Xinrui Shi, Aiping Wang, Ping Li, Shu Kee Lam
|
Publish_toSCIENCE OF THE TOTAL ENVIRONMENT
|
|
IF10.7530
|
PMID37247731
|
亚硝酸还原酶 nitrite reductase 还原亚硝酸盐的酶，同化硝酸盐的同化型亚硝酸还原酶含 siroheme（参见亚硫酸还原酶），进行 6个电子的还原产生氨。高等植物、绿藻及蓝藻的酶以铁氧还原蛋白为电子供体。高等植物只存在于叶绿体或前质体中。菠菜叶的酶分子量 6万，含 siroheme、非血红素铁及对酸不稳定的硫。粗糙脉孢菌（ Neur－ ospora crassa）的酶（分子量 29万）及大肠埃希氏菌（ Escherichia coli）的酶（分子量 19万， EC1．
化为亚硝酸；然后硝化杆菌再将亚硝酸氧化为硝酸。这两群细菌统称硝化细菌。其作用过程如下： 硝化细菌从铵或亚硝酸的氧化过程中获得能量用以固定二氧化碳，但它们利用能量的效率很低，亚硝酸菌只利用自由能的5～14％；硝酸细菌也只利用自由能的5～10％。因此，它们在同化二氧化碳时，需要氧化大量的无机氮化合物。 土壤中硝化细菌的数量首先受铵盐含量的影响，一般耕地里，每克土中只有几千至几万个。添加铵盐即可使其数量增至几千万个。土壤中性偏碱，通气良好，水分为田间持水量的50～
【原理】硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐： 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g﹣1·h﹣1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。【仪器与用具】分光光度计；真空抽气
