- ￥2200
- Solarbio
- 北京
- BC3400
- 2025年07月07日
企业认证
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- 详细信息
- 技术资料
- 保存条件：
-20°C
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Pyrophosphate: Fructose-6-Phosphate-1-Phosphoric Acid Transferase(PFP) Activity Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC3400-50T/48S
- 规格：
50管/48样
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP）活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3400
规格：50T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 |
规格 |
保存条件 |
| 提取液 |
液体55 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂一 |
液体40 mL×1瓶 |
2-8℃保存 |
| 试剂二 |
粉剂×1瓶 |
-20℃保存 |
| 试剂三 |
粉剂×1瓶 |
-20℃保存 |
| 试剂四 |
液体×2支 |
2-8℃保存 |
| 试剂五 |
液体×2支 |
-20℃保存 |
| 试剂六 |
液体60 μL×1支 |
2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、 试剂二：临用前加6 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。
2、 试剂三：临用前加6 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存两周，禁止反复冻融。
3、 试剂四：临用前取1支加入0.3 mL蒸馏水溶解备用，2-8℃保存一周。
4、 试剂五：临用前取1支加入0.3 mL蒸馏水溶解备用，-20℃分装保存一周，禁止反复冻融。
5、 试剂六：临用前加入0.6 mL蒸馏水溶解备用，2-8℃保存一周，也可按比例现用现配。
产品说明：
焦磷酸：果糖-6-磷酸-1-磷酸转移酶（PFP，EC2.7.1.90）是一种胞质酶，广泛存在于植物组织中，与磷酸果糖激酶一样催化果糖-6-磷酸的磷酸化，单PEP催化反应为可逆反应，并以焦磷酸代替ATP，在光合作用碳代谢中起重要作用。
PFP催化6-磷酸果糖转化为1,6-二磷酸果糖，它在醛缩酶和磷酸丙糖异构酶的作用下转变为磷酸二羟丙 酮，再由α-磷酸甘油脱氢酶和NADH 催化生成3-二磷酸甘油和NAD，340nm处的吸光度变化反映了PFP的活性的高低。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅/恒温培养箱、1 mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水、EP管。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1 g，加入1 mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，20000 g离心15 min，取上清置冰上待测；
2、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1 mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300 W，超声3 s，间隔7 s，总时间3 min）；然后4℃，20000 g离心15 min，取上清置冰上待测；
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30 min以上，调节波长至340 nm，蒸馏水调零。
2、 操作表：
| 试剂名称（μL） |
测定管 |
空白管 |
| 试剂一 |
670 |
670 |
| 试剂二 |
100 |
100 |
| 试剂三 |
100 |
100 |
| 试剂四 |
10 |
10 |
| 试剂五 |
10 |
10 |
| 试剂六 |
10 |
10 |
| 样本 |
100 |
- |
| 蒸馏水 |
- |
100 |
| 充分混匀于1 mL石英比色皿中测定37℃条件下，340 nm处初始值A1和30 min的吸光值A2，分别记为A1测定管、A1空白管、A2测定管，A2空白管。计算 ΔA= （A1测定管-A2测定管）-（A1空白管-A2空白管）。 注：也可将试剂一、二、三、四、五、六按操作表比例，配制成工作液，现配现用；空白管只需做1-2次。 |
||
三、焦磷酸：果糖6-磷酸-1磷酸转移酶活性的计算
（1）按照样本蛋白浓度计算
酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(W×V样÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP（U/104 cell）= ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(V样×细胞数量÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷细胞数量
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
PFP（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷V样÷T=53.59×ΔA
V反总：反应体系总体积，0.001 L；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1 cm；V样：加入样本体积，0.1 mL；V提取：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；109：换算系数，1mol=109 nmol。
注意事项：
1、每次检测样本数不宜太多以免耽误过多的酶促反应时间。
实验实例：
1、取0.1g豆芽进行样本处理，取上清后按照测定步骤操作，测得计算 A1测定管-A2测定管=1.041-0.963=0.078、A1空白管-A2空白管=0、ΔA=（A1测定管-A2测定管）-（A1空白管-A2空白管）=0.078，按照样本质量计算酶活得：
PFP（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×V反总×109÷(W ×V样÷V提取) ÷T=53.59×ΔA÷W=41.8 U/g 质量。
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