CycloheximideCHX的作用

　　Cycloheximide(Naramycin A)是真核生物蛋白质合成的抑制剂，抑制体内蛋白质合成和RNA合成的IC50值分别为532.5 nM和2880 nM。

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　　Cycloheximide的生物活性

　　体外研究

　　Cycloheximide(CHX):是最常用的用于抑制蛋白质合成的实验室试剂。Cycloheximide已显示可阻断真核翻译的延伸阶段。Cycloheximide结合核糖体并抑制eEF2介导的易位。令人惊讶的是，Cycloheximide允许一个完整的易位循环在停止任何进一步的延伸之前继续进行。Cycloheximide据推测，Cycloheximide需要E位点结合的脱酰tRNA才能发挥活性

　　体内研究

　　在用200μA电击训练之前，小鼠接受30、60或120 mg/kg的Cycloheximide注射。Cycloheximide对记忆测试试验的潜伏期有显著影响(P<0.001)。在盐水控制中，这种电击水平导致测试试验的延迟明显高于训练中的延迟。注射最低剂量的Cycloheximide测试，30 mg/kg，导致测试试验的潜伏期明显高于盐水对照组。接受两种较高剂量Cycloheximide中任一种的小鼠在测试试验中的潜伏期与盐水组相当，即在这些条件下较高剂量既不增强也不损害记忆，导致倒U型剂量反应曲线用于Cycloheximide增强记忆[2]。当在HI后0小时或6小时给予Cycloheximide时，梗塞体积通过三苯基氯化四唑(TTC)对梗塞区域的形态分析测量，分别显著减少92%和61%，但如果Cycloheximide则显示梗塞减少趋势不显著与HI对照组相比，在缺氧缺血(HI)后12小时给药，延迟至HI后24小时给药未观察到保护作用

　　cycloheximide的实验参考方法

　　细胞分析

　　为了测试细胞增殖，将每孔3000-5000个细胞（HeLa，HTB1和HEK 293T细胞;Jurkat，BT 474，HCC 1395，HCC 1937，HCC 2218和MDA MB231细胞;MCF 10A）接种在96孔板中并且允许坚持过夜。然后加入以指定浓度（0.1nM-1000μM）溶解在DMSO中的Cycloheximide，将细胞再温育24小时。以每孔1μCi加入[3H]-胸苷，并继续孵育另外7小时。用PBS洗涤细胞两次，然后用胰蛋白酶消化，然后用Tomtec收集器收集细胞并结合GF/C过滤垫。然后通过闪烁计数测量胸苷摄取。

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

　　cycloheximide的Animal Administration

　　小鼠

　　在该实验中使用雄性ICR小鼠（约2个月大）。CycloheximideCycloheximide以0（盐水对照），30,60或120mg/kg的浓度IP施用。在训练前30分钟施用Cycloheximide注射。120mg/kg剂量通常用于研究小鼠的健忘症。注意，在大鼠（1-3mg/kg）中遗忘的Cycloheximide剂量比在小鼠中低得多，这与大鼠和小鼠的LD50s的类似差异一致。注射后30-60分钟测量的Cycloheximide剂量为120-150mg/kg导致脑蛋白质合成的约95％抑制;30mg/kg的剂量产生约80％的脑蛋白质合成抑制。

　　大鼠

　　在甲氧氟烷麻醉下，在7日龄Sprague Dawley大鼠幼仔中进行单侧颈动脉结扎。颈部在中线切开，右颈总动脉用4-0丝永久结扎。每只动物的手术总时间从未超过5分钟。手术后，将大鼠返回母亲进行恢复并喂食2小时。然后将幼崽置于100分钟的缺氧期（8％O2,92％N2）中，将它们置于部分浸没在温控水浴中的气密室中，以使室内的环境温度保持恒定36°。C。在HI与Cycloheximide治疗组中，大鼠幼仔在恢复0,6,12或24小时时以0.6mg/kg的剂量腹膜内注射Cycloheximide，并向HI对照给予等体积的生理盐水。组。然后，将大鼠幼崽送回大坝直至牺牲;在HI后48和72小时分别在深度麻醉（60mg/kg，腹膜内）下进行流式细胞术和氯化三苯基四氮唑（TTC）获得全脑组织。

　　MCE尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。