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文献和实验免疫标记技术的基础和原理。 BAS 基本检测方法可分为两大类,一类以游离亲和素居中,分别连接生物素化大分子反应体系和标记生物素,称为 BAB 法或桥联亲和素生物素法(bridged avidin biotintechnique,BRAB),其改良法称为(avidin biotin complex,ABC)法。另一类以标记亲和素连接生物素化大分子反应体系,称为BA法或标记亲和素和生物素法(LAB)。现分别介绍如下: 1.BA 法亦称 LBA 法。系将特异性抗体生物素化,将酶分子标记在亲和素分子
生物制品所等单位制备的生物素―抗生物素染色药盒经质量鉴定符合标准,已提供国内市场。⑤由于生物素与抗生物素具有和多种示踪物结合的能力,可用于双重或多重免疫染色。 实验注意事项: ①内源性生物素活性及其消除:生物素是一种辅酶,是在脱羧基酶、羧基转换酶等催化的代谢环节 中所产生的羧基的中间 载体 ,它存在于某些组织和细胞内,在应用ABC染色时会与抗生物素结合而产生非特异性染色。因此,对抗生物素结合性较高的组织如肝、肾、白细胞、脂肪组织和乳腺,在应用ABC方法前应
MHC 四聚体 由于可溶性MHC单体分子与TCR的亲和力很低,解离快,而多价分子可与一个特异性T细胞上的多个TCR结合,使其解离速度大大减慢。为此Altman等提出借助生物素―亲和素级联反应放大原理构建MHC I类分子四聚体。该方法通过基因工程技术把长度为15个氨基酸残基的生物素酶底物肽(Bio A substrate peptide,BSP)加在MHCI类分子如HLA-A2重链的羧基端形成融合蛋白,在体外按一定比例与日微球蛋白及特异的抗原短肽共孵育
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