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文献和实验(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。 RIPA蛋白酶抑制剂 苯甲基磺酰氟(PMSF)(用异丙醇配制成200mM的储存液,室温保存) EDTA(钙螯合剂;用H2O配制成100mM的储存液,PH 7.4) 亮抑酶肽(Leupeptin)(用H2O配制成1mg/ml的储存液,分装,-20℃保存) 抑蛋白酶肽(Aprotinin)(用H2O配制成1mg/ml的储存液,分装,-20℃保存) 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)(用甲醇配制成1mg/ml的储存液,分装
制成1 mg/ml 的储存液,分装,-20℃保存) 胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)(用甲醇配制成1 mg/ml 的储存液,分装,-20℃保存) RIPA磷酸(酯)酶抑制剂 激活的Na3VO4(用H2O配制成200 mM 的储存液,见Sodium Orthovanadate Activation Protoco) NaF(200 mM 的储存液,室温保存) 注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂 工作液配制: 配制100 ml 的modified
,直到全部溶解,用 HCl 调节 PH 值到 7.4; 2.加 10 ml 10% 的 NP-40; 3.加 2.5 ml 10% 的去氧胆酸钠,搅拌,直到溶液澄清; 4.加 1 ml 100 mM 的 EDTA,用量筒定容到 100 ml,2~8 ℃ 保存; 5.理论上,蛋白酶和磷酸酯酶抑制剂应该在使用当天同时加入(抑蛋白酶肽,亮抑酶肽, 胃蛋白酶抑制剂各 100 μl;PMSF,Na3VO4,NaF 各 500 μl),但是 PMSF 在水溶液中很不稳定,30 分钟就会降解一半,所以 PMSF 应该
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