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- 信帆生物
- XF11132
- 国产
- 2025年07月14日
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信帆生物
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概要
黄-曲霉毒素是黄曲霉和寄生曲霉的有毒的代谢产物，主要存在于谷物、坚果和饲料中。1993年黄-曲霉毒素B1被世界卫生组织（WHO）的癌症研究机构划定为Ⅰ类致癌物，是一类毒性*的剧毒物质。它被证明对人和动物的肝脏、肾脏等组织和器官具有很大的危害。中国标准规定：黄-曲霉毒素B1在玉米、大米、小麦中*分别不得超过20、10、5μg/kg，各种饲料中黄-曲霉毒素B1的*为10-50μg/kg。黄-曲霉毒素总量试剂盒不仅可以对黄-曲霉毒素B1，而且可以对其他黄-曲霉毒素（B2、G1、G2）进行全面的检测。
原理
测定的基础是抗原-抗体反应。微孔板上包被有抗抗体。加入黄-曲霉毒素标准品或样品、酶标抗原和抗体后，游离的黄-曲霉毒素B1、B2、G1、G2与酶标抗原竞争结合抗体，抗体或抗体结合物与固定在微孔板上的抗抗体再结合，没有结合的标准品、酶标抗原及抗体被洗去，加入TMB底物显蓝色，加入终止液后颜色由蓝变黄，用酶标仪在450nm处检测，吸光值与样品中黄-曲霉毒素总量含量成负相关，与标准曲线比较即可得出黄-曲霉毒素总量的含量。
试剂盒的组成
包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）
AFT 标准品：0 ng/mL、 0.25ng/mL、0.5ng/mL、1.0ng/mL、2.0ng/mL 1 瓶 × 1.0mL
AFT酶标抗原： 1 瓶 × 10mL
AFT抗体： 1 瓶 × 10mL
10× 浓缩洗涤液： 1 瓶 × 50mL
AFT稀释缓冲液A： 1 瓶 × 50mL
AFT稀释缓冲液B： 1 瓶 × 50mL
显色底物TMB： 1 瓶 × 17mL
终止液： 1 瓶 × 7mL
试剂盒说明书： 1份
质检报告： 1份
需要的仪器、试剂
- 仪器
微量移液器：20μL-200μL单道，100μL-1000μL单道, 50μL-300μL八道
多功能旋转混合器（或者摇床、高速均质器）
酶标板振荡器
涡旋混合器
氮气吹干仪
50mL离心管
1.5mL离心管
离心机
定性滤纸
过滤漏斗
天平：感量0.01g
试剂
样品提取液70%甲醇：取700mL甲醇，加300mL纯水，混匀。
纯水（蒸馏水、去离子水）、正己烷、san氯甲烷、甲醇
8. 注意事项
室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。
在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。
标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。
混合要均匀，洗板要*（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。
终止液为强酸性物质，避免接触皮肤。
不要使用过了有效期的试剂盒，也不要混合使用不同批次的试剂盒，这样会引起测定结果不准确。
试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。
9. 黄-曲霉毒素总量试剂盒的性能指标
检测限LOD: 谷物1.5ppb(μg/kg)，饲料4.0ppb，植物油1.5ppb(μg/kg)，酱油、醋1.5ppb(μg/kg)，糕点1.5ppb(μg/kg)，酒类1.5ppb(μg/kg),发酵液3.5ppb。（LOD：空白样品测定值+2倍标准偏差SD）
定量限LOQ: 谷物3.0ppb，饲料7.5ppb，植物油2.5ppb(μg/kg)，酱油、醋2.5ppb(μg/kg)，糕点2.5ppb(μg/kg)，酒类3.0ppb，发酵液6ppb。
定量检测范围：谷物3.0-25ppb，饲料7.5-60ppb，植物油2.5-20ppb，酱油、醋2.5-20ppb，糕点2.5-20ppb，酒类3.0-25ppb,发酵液6.0-50ppb。
黄-曲霉毒素总量试剂盒
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文献和实验样本，上样，做 WB。 超离法由于 BCA 测定的浓度数值低，用了最大上样量 25 ul，试剂盒法用的体积少一些，换算后每孔的蛋白总量如下： 样本名 蛋白总量 ug/孔 UC-1 4.50 UC-2 3.50 SXX-1 25.00 SXX-2 25.00 UXX-1 25.00 UXX-2 25.00 选用外泌体标志物 CD9 和 TSG101 作为本次的检测指标，实验结果如下： 1、在 CD9 指标检测中，超离法的两个样本 UC-1 和 UC-2 尽管每孔
应用超高压液相-质谱联用技术同时测定花生及其制品中的六种黄曲霉毒素
在各种真菌毒素中，黄曲霉毒素是最为常见的一类毒素，主要分为B1、B2、G1、G2、M1、M2。在晒干、储存、加工原料花生的过程中，都会引入黄曲霉毒素[1]。毒理学研究表明，黄曲霉毒素能够造成动物精神癫痫而导致死亡[2]，甚至有证据表明，由黄曲霉毒素污染的空气中的灰尘颗粒也有可能导致肺癌的产生[3]。鉴于各种黄曲霉毒素的易引入和比较强烈的毒性，欧盟等相应的机构已经对黄曲霉毒素的含量水平做了严格的规定：在干果中B1不得超过2ug/kg,黄曲霉毒素的总量不得超过4ug/kg(B1+B
酸克伦特罗的浓度成反比。 2.2 ELISA用于饲料中毒素的测定 饲料中的毒素主要是由真菌产生的，主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素等。运用ELISA能测定饲料中霉菌毒素的含量。以测定黄曲霉毒素为例，黄曲霉毒素是一组化学结构类似的化合物，目前已分离鉴定出12种。在我国饲料标准中黄曲霉毒素的含量通常以黄曲酶毒素B1 计，本文仅介绍竞争性ELISA间接法检测黄曲霉毒素B1 。目前ELISA试剂盒也广泛用于饲料中黄曲霉毒素B1 的测定。B1 抗原能与黄曲霉毒素B1 与载体蛋白的复合物竞争抗黄曲霉毒素
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