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文献和实验分析 本应用说明介绍了每个阶段的基于成像的工作流程。为了分步演示这一工作流程,我们在细胞水平上定量评估了三维癌症细胞球的化合物诱导损伤。 图 1.采用 Evident 技术的三维细胞培养模型的成像工作流程。 1. 制备三维癌症细胞球(预培养) 癌细胞球可近似模拟体内肿瘤的细胞微环境,因此常用于抗癌药物的筛选分析。癌细胞球通常由半球形低粘附细胞培养容器中培养的癌细胞形成。 为了评估药效,我们制备了 600µm 或更大的癌细胞球。在此过程中,我们采用了 CM30 培养监测系统。该设备可用
方法。 收获细胞(保证健康的单细胞悬液)。 使用胰蛋白酶-EDTA 溶液 ( T3924 ) 分离上述贴壁细胞。Millicell® Digital Cell Imager(MDCI10000)观察到细胞融合度应为80-90%,且状态良好。 以300 x g离心细胞悬液 5分钟并吸出上清液。将细胞重悬于少量培养物中,例如 3-5 mL 的 3dGRO™ 球状体培养基 ( S3077 ) 注:可让细胞穿过40 µM细胞过滤器或带细胞过滤器卡扣盖的5 mL 圆底聚苯乙烯试管,以实现单细胞悬浮。
610A 采用 CytoFLEX 流式细胞仪上的紫光侧向散射光,有利于进行亚微颗粒分析和计数
法绝对计数。方法质控微球:带荧光的大小校准过的聚苯乙烯珠混合物(1、2)。Mgx + FSC:100 nm – 300 nm – 500 nm – 900 nm 微球, 适用于以 FSC 触发检测微颗粒的 FCMr(例如,具有 W² 的 B.C.Gallios/Navios、Astrios、带 PMT-FSC 的 BD FACS-SORP、Influx)。Mgx + SSC:160 nm – 200 nm – 240 nm - 500 nm 微 球,适用于以 SSC 触发检测微颗粒的 FCMr
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