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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
57
- 检测方法:
微量法、紫外分光光度法
- 规格:
100管/96样/50管/48样
| 规格: | 100管/96样 | 产品价格: | ¥650.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50管/48样 | 产品价格: | ¥344.5 |
| 产品名称 | 线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)测试盒 |
| 规格 | 100管/96样 50管/48样 |
| 测试方法 | 微量法、紫外分光光度法 |
| 货号 | LZ-S01144 |
商品介绍:
测定意义
ICDHm(EC 1.1.1.41)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,在三羧酸循中催化异柠檬酸生成α-酮戊二酸,同时将NAD+ 还原为NADH,是三羧酸循环的限速酶之一,其催化的反应是细胞NADH主要来源之一。
测定原理
ICDHm催化NAD+ 还原生成NADH,导致340nm处光吸收上升。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤(以组织样本为例):
1、样本处理:称取1g组织于玻璃管中,加入1mL 6mol/L HCl,放入110℃烘箱中6~12h,离心机16000g 25℃离心20min,取上清液至新离心管中 ,然后加10mol/L NaOH调节pH至7.0。
2、试剂准备:
1)Substrate:加入8mL Substrate Diluent溶解。(现配现用)
2)Dye Reagent:加入4mL Dye Reagent Diluent溶解。(现配现用)
3)标准品:加入1mL蒸馏水溶解Standard得到Standard①;从Standard①取10μL加入990μL蒸馏水中得到Standard②;取200μL Standard②加入800μL蒸馏水中,制备得到浓度为200μmol/L的Standard。
\商品介绍:
测定意义
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
测定原理:
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
注意事项:
1.阳性对照H2O2一般使用浓度为100 μM (推荐浓度50-200 μM,具体依细胞类型而定) 。通常刺激后30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高,可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强,可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
2.实验过程中,如果阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1:2000-1:5000 稀释荧光探针DCFH-DA,使DCFH-DA的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在15-60 min 内适当进行调整,尽量缩短读片时的曝光时间,并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
活性氧阳性对照 (H2O2) 仅仅用于作为阳性对照的样品,并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
3.探针装载后,一定要洗净未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
优势:
1.提供了详细的样品制备和结果计算方法;
2.提供标准品和标准曲线作参考;
3.经过多种样本验证;动植物组织、细胞、血清、血浆,细菌等样本均已经过了验证,高度的兼容和匹配度,让您的样本充分发挥作用,不浪费。
4.无放射性,安全稳定;无放射性试剂,其保质期长达一年以上,排除客观因素的干扰。
5.操作便捷;步骤简单,2小时内完成检测。
| Pyruvate (PC) | CD56-APC |
| Pyridoxamine-5'-Phosphate Oxidase (PNPO) | CD56-PE |
| Pyridoxamine-5'-Phosphate Oxidase (PNPO) | CD69 |
| Pyridoxal Kinase (PDXK) | CD336 |
| Pyridoxal Kinase (PDXK) | EDTA二钾血液抗凝液 |
| Pyridoxal Kinase (PDXK) | EDTA三钾血液抗凝液 |
| Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) | EDTA钠血液抗凝液 |
| Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) | ACD血液抗凝液 |
| Purine Nucleoside Phosphorylase (PNP) | 血液抗凝液 |
| PTEN Induced Putative Kinase 1 (PINK1) | OXALATE(钠盐)血液抗凝液 |
| PTEN Induced Putative Kinase 1 (PINK1) | OXALATE(钾盐)血液抗凝液 |
| Pseudouridylate Synthase 1 (PUS1) | OXALATE(氨盐)血液抗凝液 |
| Pseudouridylate Synthase 1 (PUS1) | OXALATE(氨钾盐)血液抗凝液 |
| Protoporphyrinogen Oxidase (PPOX) | FLUORIDE血液抗凝液 |
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文献和实验异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase
异柠檬酸脱氢酶 isocitrate dehydrogenase 有两种类型的酶:要求以 NAD为辅酶的酶( EC1. 1. 1. 41)和要 NADP的酶( EC1. 1. 1. 42),两者催化同一反应。 异柠檬酸 NAD( P) α -酮戊二酸 CO2 NAP( P) H H4 在三羧酸循环中正常起作用的是要求 NAD为辅酶的酶,此酶是为 ADP激活的变构酶。
异柠檬酸 isocitric acid柠檬酸的异构体,虽然量少,但广泛存在于生物界。在落地生根属( Bryophyllum)等多汁植物的叶、或悬钩子类中特别多,生物能够利用的是 D型。是三羧酸循环中的一个成分。柠檬酸在鸟头酸酶的作用下可逆地生成异柠檬酸和顺鸟头酸。在异柠檬酸脱氢酶( EC1. 1. 1. 41)的作用下变成 a-酮戊二酸,在异柠檬酸裂合酶( isocitrate lyase, EC4. 1. 3. 1)的作用下变成琥珀酸与乙醛
,使氧化磷酸化速度加快,ADP+Pi接受能量生成ATP。机体消耗能量少时,线粒体内ATP/ADP值增高,线粒体内ADP浓度减低就会使氧化磷酸化速度减慢。 (二)ATP/ADP值的间接影响 ATP/ADP值增高时,使氧化磷酸化速度减慢,结果NADH氧化速度减慢,NADH浓度增高,从而抑制了丙酮酸脱氢酶系、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶系和柠檬酸合成酶活性,使糖的氧化分解和TCA循环的速度减慢。 (三)ATP/ADP值对关键酶的直接影响 ATP/ADP值增高会抑制体内的许多关键
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