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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
56
- 检测方法:
微量法、紫外分光光度法
- 规格:
100管/96样/50管/48样
| 规格: | 100管/96样 | 产品价格: | ¥422.5 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50管/48样 | 产品价格: | ¥227.5 |
| 产品名称 | 线粒体苹果酸脱氢酶(MDHm)测试盒 |
| 规格 | 100管/96样 50管/48样 |
| 测试方法 | 微量法、紫外分光光度法 |
| 货号 | LZ-S01148 |
商品介绍:
测定意义
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH,细菌中通常只含有NAD-MDH,在真核细胞中,NAD-MDH分布于细胞质和线粒体中。
测定原理:
MDHm催化NADH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1 mL石英比色皿和蒸馏水。
操作步骤(以组织样本为例):
1、样本处理:称取1g组织于玻璃管中,加入1mL 6mol/L HCl,放入110℃烘箱中6~12h,离心机16000g 25℃离心20min,取上清液至新离心管中 ,然后加10mol/L NaOH调节pH至7.0。
2、试剂准备:
1)Substrate:加入8mL Substrate Diluent溶解。(现配现用)
2)Dye Reagent:加入4mL Dye Reagent Diluent溶解。(现配现用)
3)标准品:加入1mL蒸馏水溶解Standard得到Standard①;从Standard①取10μL加入990μL蒸馏水中得到Standard②;取200μL Standard②加入800μL蒸馏水中,制备得到浓度为200μmol/L的Standard。
\商品介绍:
测定意义
MDH (EC 1.1.1.37)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,线粒体中MDH是TCA循环的关键酶之一,催化苹果酸形成草酰乙酸;相反,胞浆中MDH催化草酰乙酸形成苹果酸。草酰乙酸是重要的中间产物, 连接多条重要的代谢途径。因此,MDH在细胞多种生理活动中扮演着重要的角色,包括线粒体的能量代谢、 苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不同的辅酶特异性,MDH分为NAD-依赖的MDH和NADP-依赖的MDH, NADP-MDH主要存在于真核细胞中。
测定原理:
NADP-MDH催化NADPH还原草酰乙酸生成苹果酸,导致340nm处光吸收下降。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
注意事项:
1.阳性对照H2O2一般使用浓度为100 μM (推荐浓度50-200 μM,具体依细胞类型而定) 。通常刺激后30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高,可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强,可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
2.实验过程中,如果阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1:2000-1:5000 稀释荧光探针DCFH-DA,使DCFH-DA的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在15-60 min 内适当进行调整,尽量缩短读片时的曝光时间,并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
活性氧阳性对照 (H2O2) 仅仅用于作为阳性对照的样品,并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
3.探针装载后,一定要洗净未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
优势:
1.提供了详细的样品制备和结果计算方法;
2.提供标准品和标准曲线作参考;
3.经过多种样本验证;动植物组织、细胞、血清、血浆,细菌等样本均已经过了验证,高度的兼容和匹配度,让您的样本充分发挥作用,不浪费。
4.无放射性,安全稳定;无放射性试剂,其保质期长达一年以上,排除客观因素的干扰。
5.操作便捷;步骤简单,2小时内完成检测。
| Pyruvate Dehydrogenase Phosphatase (PDP) | 淋巴细胞增长培养液 |
| Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 3 (PDK3) | 淋巴细胞基础培养液 |
| Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 2 (PDK2) | 人体NK细胞完全培养液 |
| Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 1 (PDK1) | 全血基因组DNA纯化试剂盒 |
| Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 1 () | 大量全血基因组DNA纯化试剂盒(20毫升全血) |
| Pyruvate Dehydrogenase Kinase Isozyme 1 (PDK1) | 树脂法微量全血DNA纯化试剂盒 |
| Pyruvate Dehydrogenase Complex Component X (PDHX) | 白细胞裂解液 |
| Pyruvate Dehydrogenase Complex Component X (PDHX) | 血清样品树脂法去内毒素试剂盒 |
| Pyruvate Dehydrogenase Complex Component X (PDHX) | 血清样品液相法去内毒素试剂盒 |
| Pyruvate Dehydrogenase Beta (PDHb) | 血清样品沉淀法去内毒素试剂盒 |
| Pyruvate Dehydrogenase Beta (PDHb) | 血影细胞(GHOST)制备试剂盒 |
| Pyruvate Dehydrogenase Alpha 2 (PDHa2) | 血影细胞膜荧光染色试剂盒 |
| Pyruvate dehydrogenase alpha 1 (PDHA1) | 血影细胞膜尼罗红荧光染色试剂盒 |
| Pyruvate dehydrogenase alpha 1 (PDHA1) | 红细胞膜脂质成分分离试剂盒 |
| Pyruvate dehydrogenase alpha 1 (PDHA1) | 人体血小板粗提分离试剂盒 |
| Pyruvate Carboxylase (PC) | 人体血小板高纯分离试剂盒 |
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文献和实验内膜和嵴包围着的线粒体内部空间, 含有很多蛋白质和脂类,催化三羧酸循环中脂肪酸和丙酮酸氧化的酶类, 也都存在于基质中。此外, 还含有线粒体DNA、 线粒体核糖体、tRNAs、rRNAs以及线粒体基因表达的各种酶。基质中的标志酶是苹果酸脱氢酶。
机制比较复杂,不仅需借助苹果酸、草酸乙酸的氧化还原,而且还要借助α酮酸与氨基酸之间的转换,才能使胞液中来的NADH的还原当量转移进入线粒体氧化,具体过程如图6-10。 图6-10 苹果酸-天冬氨酸穿梭� GOT:谷草转氨酸;MDH:苹果酸脱氢酶 当胞液中NADH浓度升高时,首先还原草酰乙酸成为苹果酸,此反应由苹果酸脱氢酶催化,胞液中增多的苹果酸可通过内膜上的二羧酸 载体 系统与线粒体内的α酮戊二酸交换;进入线粒体的苹果酸,经苹果酸脱氢酶
同一种生物有两种以上催化同一反应的酶,而其蛋白质的一级结构互不相同,而是由不同的基因所决定的,称此为同功酶。如动物细胞的线粒体与细胞液的苹果酸脱氢酶互为同功酶。此处鸡的乳酸脱氢酶根据其电泳可分为 5种同功酶,各由四条二种不同的多肽链( H与 M)组成的( H4 , H3 M, H2 M2 , HM3 , M4 ),仅由一种肽链组成的,称为肌肉型( M4 )和心脏型( H4 ),其免疫学性质、氨基酸组成和若干酶学性质各不相同,对两者的混合物进行肽链的解离和重组时可生成
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