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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 肿瘤类型:
否
- 供应商:
上海研生
- 库存:
36
- 生长状态:
贴壁
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 细胞形态:
皮样, 多角形细胞
- 物种来源:
人
- 组织来源:
人的正常扁桃体组织
- 规格:
5×10⁵Cells/T25培养瓶
| 细胞名称 | 人原代扁桃体动脉内皮细胞 | 组织来源 | 人的正常扁桃体组织 |
| 商品货号 | YS-01X7782 | 种属来源 | 人 |
| 包被条件 | 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |
| 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 皮样, 多角形细胞 |
| 传代特性 | 细胞特性确定传代 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养基 | 原代内皮细胞培养体系 | 培养条件 | 气相: 空气,95%;CO2 ,5% |
| 细胞简介 |
| 扁桃体是一对扁卵圆形的淋巴器官, 位于扁桃体窝内。按其位置分别称为腭扁桃 体、咽扁桃体和舌扁桃体。其中,腭扁桃体大, 通常所说的扁桃体即为腭扁桃 体。 腭扁桃体我为多源性血供器官, 主要的营养动脉分别为腭升动脉、面动脉和 咽升动脉。动脉内皮组成了动脉内壁,并持续受到血流剪切力的影响。内皮细胞 在切应力的作用下, 分泌不同的内皮因子并进而影响血管收缩和生长。 |
质量检测:实验室分离的人原代扁桃体动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人原代扁桃体动脉内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,人原代扁桃体动脉内皮细胞以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
人原代扁桃体动脉内皮细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈皮样, 多角形细胞 ,在技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,
37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验
器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL
(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项:
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶盖需拧松半圈。
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文献和实验正常人脐静脉原代内皮细胞培养一、实验试剂1、培养基: PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplem e nt2、冻存液: PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液: 1 × PBS (pH 7.4 ) + 1% P/S4、染色液: 0.4% Trypan Blue5、消化液: PriCells Isolation of Primary Cell Kit6、检测试剂:抗人
的[5],但细胞得率均较低,而近些年来国外大多数方法采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养[6~9,11,12]。由于原代培养中无法避免地混杂成纤维细胞、周细胞、平滑肌细胞、星型胶质细胞等其他细胞的生长,而且工作量大、过程繁琐且费用高[1],进行较纯的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养一直是国内外的一个难点。 本人参照文献[6]、[7]、[8]的方法,成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法,并获得纯度较高的脑微血管内皮细胞。 1.材料与方法 1.1 实验动物 每次
PriCells: 原代血管内皮细胞、Angiogenesis、VEGF
PriCells: 原代血管内皮细胞、Angiogenesis、VEGF 血管内皮细胞是位于循环血液与血管壁内皮下组织之间的单层细胞。血管内皮细胞在血栓与止血、血管新生、辐射损伤、炎症及免疫反应等一系列重要的病理生理过程起着重要的作用。脐静脉内皮细胞培养和鉴定方法:采用胰蛋白酶行脐静脉两次酶灌注消化法获取内皮细胞。分别在倒置相差显微镜、透射电镜下观察,SP免疫组化法行Ⅷ因子抗原鉴定。观察血管内皮细胞体外培养的生长情况,并绘制细胞生长曲线。血管 内皮细胞生理功能1、内分泌功能:内皮细胞
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