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文献和实验ELISA信号太弱/不显色全白板怎么办?学会这几招拯救你的实验!
显色,导致全板信号偏弱甚至不显色。自配试剂和样品中如果含有该类物质会影响显色。 6、仪器与读板设置 —— "假性白板"的高发区 ·参比波长设错。酶标仪没预热、光源老化、滤光片错误。板底脏、有水渍、有指纹。孔里有气泡等。 四、如何解决:一套能照着做的排查流程 弱信号的排查,先判断属于哪种场景,再走对应流程。 场景 A:全板不显色(终止后全白,OD ≈ 底物空白) ELISA 反应链条断了,酶没能结合到板上催化显色。优先检查是否漏加酶标抗体、酶标物是否失活、底物是否失效、关键步骤有没有漏做。 场景 B
1、免疫检测的基础知识ELISA是一种免疫测定。免疫测定(immunoassay,IA)是应用免疫学技术测定标本的方法。在临床检验中主要通过抗原抗体反应检测体液中的抗体或抗原性物质。1.1 抗原抗原是能在机体中引起特异性免疫应答的物质。抗原进入机体后,可刺激机体产生抗体和引起细胞免疫。在免疫测定中,抗原是指能与抗体结合的物质。能在机体中引起抗体产生的抗原多为分子量大于5000的蛋白质。小分子化合物在与大分子蛋白质结合后能引起机体产生特异性抗体的,称为半抗原(hapten)。例如某些激素、药物
等。其活化过程中产生的裂解片段则以小写字母区分:如C3裂解为小片段C3a和大片段C3b。凝集素途径中的蛋白发现较晚,采用不同命名规则,如因子B和因子D,其裂解产物同样以a、b表示,其中大片段为Bb,小片段为Ba。补体成分被激活后,常在名称上方加横线表示其活化状态,如C1̅或C3̅b̅,以区别于非活化形式,体现其功能活性的改变。 补体的主要成分 补体系统由约50种可溶性和膜结合蛋白构成,是机体最复杂的限性蛋白水解系统。血清中补体多以非活性形式存在,需激活才能发挥作用。根据功能可分为三类:一是参与级联活化
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