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信帆生物
冻干粉:冻干菌粉、冻干管,一次性用完,不得留存
斜面:活化好的菌可直接使用,短期保藏,取用方便
菌液:直接在液体培养基中接种新鲜的培养物培养规定时间后形成的菌悬液,活菌、使用方便
平板:冷却凝固后的固体培养基在无菌培养皿中形成的培养基固体平面
传代方法:
①准备上述平板2块;
②安瓿管表面消毒后在安全柜中打开,用酒精灯灼烧顶部,后迅速滴上无菌水使之破裂,随后用镊子将其敲碎;
③吸取0.5mL无菌水打入冻干管,充分溶解菌粉后,打入2块平板,200μL/个,涂布均匀;
④将平板置于上述培养条件下培养,菌种长出即可使用。
菌种鉴定:
(1)传统的生化方法对微生物进行正确的分类存在较大的困难。而随着分子生物学技术的发展,核酸序列分析已被广泛的应用于微生物鉴定中,通过基因序列分析,可以快速准确地对微生物的种属进行鉴定。目前、原核生物的种属鉴定主要采用16S rDNA测序技术,真核生物主要采用18S rDNA或ITS测序。
(2)16S rDNA是编码原核生物核糖体小亚基Rrna(16S rRNA)的DNA序列,存在于所有细菌染色体基因组中。16S rDNA分子大小适中,突变率小,是细菌系 统分类学研究中最常用,最有用的“分子钟”。其序列包含9个可变区(variable region)和10个恒定区(constant region)。保守序列区域反映了生物物种 间的亲缘关系,而高变序列区域则能体现物种间的差异。16S rDNA的序列特征为不同分类级别的近缘种系统分类奠定了分子生物学基础。
(3)与细菌多样性分析类似,在真核微生物中也有三类核糖体RNA(rRNA),包括5.8S rRNA、18S rRNA和28S rRNA。18S rRNA基因是编码真核生物核糖体小亚基的DNA序列,其中既有保守区,也有可变区(V1-V9,没有V6区)。保守区域反映了生物物种间的亲缘关系,而可变区则能体现物种间的差异,适用于作种级及以上的分类标准。其中,V4区是文献中常用的检测片段。
(4)ITS序列是内源转录间隔区(Internally Transcribed Spacer),位于真菌18S、5.8S和28S rRNA基因之间,分别为ITS 1和ITS 2。 在真菌中,5.8S、18S和28S rRNA基因具有较高的保守性,而ITS由于承受较小的自然选择压力,在进化过程中能够容忍更多的变异,在绝大多数真核生物中表现出极为广泛的序列多态性。同时,ITS的保守型表现为种内相对一致,种间差异较明显,能够反映出种属间,甚至菌株间的差异。并且ITS序列片段较小(ITS 1和ITS 2长度分别为350 bp和400 bp),易于分析,目前已被广泛用于真菌不同种属的系统发育分析。
(5)使用PCR技术,对16S rDNA,18S rDNA或ITS序列进行扩增,然后PCR产物进行测序,即可获得相应的碱基序列。然后将序列在NCBI上进行Blast比对,即可获知与该序列同源性较高的已知序列,为确定菌种的分类学地位提供依据。
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文献和实验相关实验
黄色短杆菌 短杆菌属,放线菌目中的一属专性好氧、过氧化氢酶阳性、无芽孢的革兰氏阳性短杆状细菌。菌落自黄色至橙色均有。生长温度20~25℃。氧化性代谢。在含4%NaCl的胰蛋白胨-黄豆胨琼脂上生长良好。分布在某些干酪上。G+C%(摩尔)值为60~64.模式种为扩展短杆菌(B.linens)。本属中的黄色短杆菌(B.flavum)能发酵葡萄糖生产L-谷氨酸,是重要的工业菌种。
为带支链氨基酸之一。几乎所有的蛋白质都含 L-亮氨酸,玉米蛋白( zein)(约 25%)、血红蛋白(约 29%),酪蛋白(约 9%)等都含有很多。此外也有以自然游离状态存在的。蛋白质中不含 D-亮氨酸,但多肽性抗菌素短杆菌肽、多粘菌素中作为组成成分含有 D-亮氨酸。是必需氨基酸之一。是酮原性氨基酸之一,在生物体内由于氨基转移、脱羧变成异戊酰 CoA,经过和脂肪酸类似的代谢过程固定二氧化碳后分解成乙酰乙酸和乙酰 CoA。在能进行生物合成亮氨
分子肽也天然存在。一般为无色微粉状结晶。熔点(分解点)为 200— 250℃左右,大多可溶于水、酸和碱中,难溶于有机溶剂。随着分子量的增大,变得难溶于水,水溶液变成象天然蛋白质那样起泡沫,可被盐析。三肽以上可显示双缩脲反应。水解则产生氨基酸。环状肽常见于抗菌物质(短杆菌肽等)。
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