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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 肿瘤类型:
否
- 供应商:
上海研生
- 库存:
44
- 生长状态:
贴壁
- 是否是肿瘤细胞:
否
- 细胞形态:
成纤维细胞样
- 物种来源:
大鼠
- 组织来源:
胚胎;肺组织
- 规格:
5×10⁵Cells/T25培养瓶
| 细胞名称 | 大鼠胚肺成纤维细胞 | 组织来源 | 胚胎;肺组织 |
| 商品货号 | YS-01X7532 | 种属来源 | 大鼠 |
| 包被条件 | 换液频率 | 每2-3天换液一次 | |
| 生长特性 | 贴壁 | 细胞形态 | 成纤维细胞样 |
| 传代特性 | 可传5代左右;3代以内状态最佳 | 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养基 | 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 | 培养条件 | 气相:空气,95%;CO2,5% |
| 细胞简介 |
| 大鼠胚肺成纤维细胞分离自胚肺组织;肺是机体的呼吸器官,位于胸腔,左右各一,覆盖于心之上。肺有分叶,左二右三,共五叶。肺经肺系(指气管、支气管等)与喉、鼻相连,故称喉为肺之门户,鼻为肺之外窍。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞在合成和分泌细胞因子、维持血管内外和凝血和纤溶的的动态平衡中起重要作用。 |
质量检测:实验室分离的大鼠胚肺成纤维细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
大鼠胚肺成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,大鼠胚肺成纤维细胞以此保证该细胞的最佳培养状态。
二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
大鼠胚肺成纤维细胞是一种贴壁细胞,细胞形态呈成纤维细胞样 ,在技术部标准操作流程下,细胞可传2-3代;建议您收到细胞后尽快进行相关实验。客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余胰蛋白酶消化液,
37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml完全培养基终止消化;
3)用吸管轻轻吹打混匀,按传代比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的完全培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度
的细胞培养箱中静置培养;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液,1000rpm,离心5min,保留沉淀;
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中,重悬沉淀,放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min);消化完向离心管内
加入5ml完全培养基终止消化;
3)经1000rpm,离心5min,丢弃上清,用5ml完全培养基(补加1%FBS,促进贴壁)重悬沉淀,接种于新的培养瓶内;
4)待细胞完全贴壁后,培养观察;之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
4. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性,贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿(如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等)时,需要对实验
器皿进行包被,以增强细胞贴壁性,避免细胞因没贴好影响实验;包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) ,多聚赖氨酸PLL
(0.1mg/ml),明胶(0.1%),依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
原代细胞培养方法及注意事项:
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青链霉素的
混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒
入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化
时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即
终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,
加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在
7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶盖需拧松半圈。


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文献和实验实验材料: 1. 肺组织:取自妊娠14—18周的胎儿; 2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2; 3. 消化液:0.25%胰蛋白酶(pH7.6—7.8),0.02%EDTA溶液; 4. 培养液:DMEM或RPMI1640,加10%—20%胎牛血清、青霉素100IU/ml、链霉素100μg/ml; 5. 保存液:10%二甲亚砜或10%甘油; 6. 眼科剪、眼科镊等无菌消毒手术器械;
瓶倾斜放置在温箱中,干贴壁2-4 h后,将培养瓶慢慢翻转平放,继续静置培养。注意上述操作过程中动作要轻柔,让液体慢慢覆盖组织小块,严禁动作过快致使液体产生的冲力使粘贴的组织块漂起而造成原代培养失败。48 h后换液,更换2-3 ml即可。 2.6 贴块贴壁72 h后,镜下可见大量的成纤维细胞爬出,将组织块去除,继续培养2-3天,待细胞长满,即可传代。注:因为血清浓度低,内皮细胞可以爬出少量,但是很快就会死掉。 2.7 传代用0.25%胰酶常规消化,以1:2传代,传代完后,采用
大鼠成纤维细胞生长因子(FGF ) 酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆及相关液体样本中成纤维细胞生长因子(FGF ) 的含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 成纤维细胞生长因子(FGF ) 水 平。用纯化的大鼠 成纤维细胞生长因子(FGF ) 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 成纤维细胞生长因子(FGF
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