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文献和实验Expi Supernatant 进行培养。 纯化过程中,选择柱体积为 0.2 ml 的三种纯化柱:Ni Sepharose 6 FastFlow, Ni Sepharose Excel, 和 Strep-Tactin®XT 4Flow®。 分别用其纯化 60CV (column volume, 柱体积) 和 120CV 的样品,并保持上样样品中的蛋白质含量在纯化柱最大结合载量 80%-95 %。 二、实验结果 01 对比蛋白质回收效率 对于不同的填料,可以从洗脱组分中回
:Strep-Tactin®和Strep-Tactin®XT,都可以结合2种Strep标签(注:Strep-tag II也能与Strep-Tactin®XT结合)。 Strep-Tactin®和Strep-Tactin®XT 均是优化过的链霉亲和素,为四聚体形式。每个单体的分子量为13 kDa。总分子量为52 kDa。 由于Strep-Tactin®在变性条件下并不稳定(例如:使用尿素时),无法进行纯化,且进行批量纯化时,搭配Twin-Strep-tag®效果仍有改善的空间。所以科研人员继续改进
Strep-tag®:适用范围广 纯化选择多 由于 His-tag 系统使用 Ni 离子,所以在纯化金属蛋白(多数为酶)时,可能会受到金属间交互作用的干扰,而使用 Strep-tag® 则不会出现此问题,因 Strep-Tactin® XT 与 Strep-tag® 的特异性结合不受金属离子影响。且因其温和的纯化流程,所以还能用于纯化大型蛋白、多亚基的蛋白复合体或是跨膜蛋白,并且保持蛋白功能。以 Strep-tag® 系统纯化出不同的蛋白,下图为例: 图 1 依据研究项目的不同,各实验室使用
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