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15min高产全血基因组DNA
企业认证
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42
2 年
上海西格
-20°C
50T
描述:该试剂盒采用独特的裂解液,可快速可靠的从抗凝全血样本中纯化出高纯度的基因组 DNA,最大限度的去除蛋白、色素、脂类等杂质污染。应用本试剂盒获取的 DNA纯度高,无抑制剂,A260/A280 为 1.6-1.9。应用本试剂盒提取的 DNA 可直接用于限制性酶切反应、PCR、文库构建、Southern 杂交等多种分子生物学实验。注意事项:(1) 本试剂盒中的 Washing Buffer 中已经加乙醇,无需单独添加。(2)gDNA LB1,储存时可能会有白色结晶沉淀,放置于56℃水浴锅溶解后,不影响使用效果。(3)蛋白酶 K(20 mg/ml)长期保存请储存于-20℃,短期室温保存(6 个月),其它组分储存于室温。(4)该试剂盒的保质期为 2 年。
操作方法(1)样本处理(1.5 或 2 ml EP 管中处理)人抗凝全血:吸取 0.2~0.8 ml 抗凝全血加入到 800 μl 红细胞裂解液中上下颠倒混合均匀,13000rpm 离心 30s,去上清,留白细胞沉淀,用 50 μl 水重悬白细胞沉淀(有少量红细胞残留并不影响 DNA 的产量,如仍然有大量红细胞未裂解,可再次用红细胞裂解液将红细胞裂解)。淋巴细胞分离液分离出的白细胞:直接吸取 50~80 μl 白细胞。有核红细胞抗凝全血(禽血):吸取 10 μl 抗凝全血加入到50 μl 无菌水中,漩涡震荡混合均匀。(2)向上述准备好的样品溶液中加入 100 μl gDNA LB1 和20 μl 蛋白酶 K 漩涡混合均匀 10s,56℃水浴锅中消化5~30min(长时间消化可提高 DNA 的产量)。(3)加入 700 μl gDNA BB2 漩涡震荡混合均匀 1min,肉眼观察有无未溶解的血凝块,如果无血凝块,则直接倒入到吸附柱中,13000rpm 离心 1min。注意:如果有未溶解的血凝块,则短离心去除血凝块后,再倒入到吸附柱中,进行后续离心操作。(5)倒掉废液,向吸附柱中加入 500 μl Washing Buffer,13000rpm 离心 15s。重复此步骤一次。(6)将吸附柱重新放回离心机,13000rpm 空离心 2min,将残留的乙醇彻底甩干。(7)将吸附柱芯放入到 1.5ml 收集管中,向吸附柱芯中加入 60~150 μl DNA Elution Buffer(DNA Elution Buffer 预热到 65℃将提高洗脱产量),室温放置 1min,13,000rpm 离心1min,洗脱液即为基因组 DNA,冷冻保存。 PCR 反应需要使用哪些试剂?一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物; PCR反应基本步骤:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:变性(Denaturation):利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。退火或称接合,复性(Annealling):在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。延伸(Extension):DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。公司供应的相关产品:
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