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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
53
- 保质期:
2 年
- 供应商:
上海西格
- 保存条件:
-20°C
- 规格:
50 ug
| 货号 | 产品名称 | 规格 |
| XG-P3091 | T7 gp4B protein | 50 ug |

描述:
T7 gp4 蛋白来源于 T7 噬菌体,是其复制系统的一种核心蛋白,它既具有引发酶的作用也具有解旋酶的活性,主要应用于全基因组扩增(WGA),且在扩增环状全基因组上有非常大的优势,常用于病毒检测。噬菌体T7 基因 4 编码产物 T7 gp4B 蛋白(T7 Gene 4,gp4),分子量 56kD,参与噬菌体的 DNA 复制。T7 gp4B 蛋白为 T7 gp4A 蛋白的截短产物,其蛋白 N 端的缺失导致该蛋白 Primase 活性缺失,但保留了解旋酶活性。据文献报道该蛋白具有 dTTP 水解活性,其具有 5’-3’解旋酶(helicase)活性。该蛋白为基因工程产物,通过重组表达纯化获得的可溶产物。

储存:-20℃可保存 3 年。
蛋白保存液:
20mM Tris-HCl,pH7.5
200mM NaCl
5mM DTT
25%甘油
PCR反应基本步骤:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:
变性(Denaturation):
利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。
退火或称接合,复性(Annealling):
在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。
延伸(Extension):
DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。
PCR 反应需要使用哪些试剂?
一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;
二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;
三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;
五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;
六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。
七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。
八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物;
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文献和实验Use of the Vaccinia Virus/T7 Expression System for Studying HCV Protein Processing
/El, E1/E2, E2/p7, and p7/NS2 sites) (9 ,13 ), whereas an HCV-encoded serine proteinase located in the N-termmal one-third of the NS3 protein is responsible for four cleavages in the NS region (3/4A, 4A/4B, 4B/5A, and 5A/5B sites) (11 ,14 –16 ).
in vitro8) Anneal oligo A and oligo B separately to T7 primer (TAATACGACTCACTATAGG) or toprimers that are complementary to oligoA and B.9) Use 2-3 ug annealed primer in a 20ul Ambion T7 Megashort script reaction Ambion Cat# 1354 (Follow Ambion’s protocol
Assaying AKT/Protein Kinase B Activity
Akt/protein kinase B (PKB) is a serine/threonine kinase that mediates many of the anabolic actions of insulin ( 1 ), as well as the growth-promoting and/or antiapoptotic effects of other growth factors, cytokines
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