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Tte AP 热稳定核酸酶
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25
2 年
上海西格
-20°C
1000U/5KU
描述:
ThermoStable dsAP Nuclease (耐热双链特异性AP 核酸内切酶) 来源于嗜热菌,是一种热稳定的特异性识别双链脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点的核酸内切酶。该酶可切割 AP 位点 5’端的第一个磷酸二酯键,产生 3′羟基和 5′脱氧核糖磷酸末端(deoxyribose phosphate, dRP)。该酶作用底物为双链 DNA(含 AP 位点),对单链DNA(含 AP 位点)、ssDNA、dsDNA 无活性。该酶的最佳活性温度为 60-70°C,在 85°C 以上温度逐步失活。
单位定义:一单位指,在 10μl 反应体系中,60°C 反应 15min,切割1 pmol 含一个 AP 位点的寡核苷酸双链,所需要的酶量。1×dsAP Buffer:10mM Tris-HCl,pH7.8; 50mM KCl;0.1% Tween20;0.02% BSA, 5mM Mg2+。酶储存液:20 mM Tris-HCl, 50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1mM EDTA, 50% Glycerol, pH 7.8。使用方法含 AP 位点的 DNA 2-20pmol10xdsAP Buffer 2 μlThermoStable dsAP Nuclease 1 μlddH2O Up to 20 μl60°C 反应 15-30min
PCR反应基本步骤:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:变性(Denaturation):利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。退火或称接合,复性(Annealling):在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。延伸(Extension):DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。 PCR 反应需要使用哪些试剂?一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物; 公司供应的相关产品:
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