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RTS BL21(DE3)Ch
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33
2 年
上海西格
-20°C
10T
描述:BL21(DE3) Chaprone 感受态细胞中含有分子伴侣蛋 白质粒,其表达产物可协助重组蛋白正确折叠形成可溶活性 蛋白。分子伴侣蛋白质粒为氯霉素抗性(chloramphenicol, Cmr)的表达受控于四环素(tetR)操纵子,因此该感受态 不适用于氯霉素抗性表达质粒的转化。 本品使用 独有的化学感受态专利技术制备, 其室温可保存 3 天、-20°C 可保存 2 年(推荐保存温度)、 -80°C 可长期保存性能无下降。运输过程中无需干冰,可常 规冰袋运输(推荐运输温度)。该感受态细胞为热激感受态 细胞,转用于蛋白表达(不可用于克隆和载体构建),经 42°C 热激 1min 可获得 105~106 cfu/μg 效价,可满足质粒转化要 求。该制品使用简单、运输、储存方便。
组分RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell(10T) 1 瓶Nano E.coli Transfection Reagent 1 mL储存:RTS 系列感受态为干粉形式,均可室温保存 3 天,长期保存-20°C(2 年)。经 Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受态必须分装后,并于-60°C 以下保存。溶解后的感受态细胞避免反复冻融,在-60°C 以下可保存 6 个月。操作方法1. 从-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent彻底融化,放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli TransfectionReagent 加入到一支冻干感受态细胞中,并分装到 10 支 1.5ml EP 管中(每支 30 μl),于-60°C 以下保存(或立即使用)。2. 将 10~100 ng 质粒 DNA(不可使用连接产物、不可使用氯霉素筛选标记质粒)加入到分装的感受态细胞中,轻弹EP 管(或枪头轻轻吹打),置于冰上 15min。3. 置于 42°C 热激 1 min 后,迅速置于冰上急冷 2 min。4. 热激完毕后,向上述感受态细胞中加入 450 μL 不含抗生素的 SOC(或 LB)培养基,37 °C 振荡(225 rpm)培养60 min。使质粒上抗性标记基因表达,菌体复苏。5. 取200 μl复苏菌液涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。(含相应质粒抗生素和 20 μg/ml 氯霉素)6. 将平板置于 37 °C 培养,12~18 小时后可出现菌落。7. 挑选生长良好的菌落,接入 LB 培养基(含相应质粒抗生素,20 μg/ml 氯霉素),37 ℃剧烈振荡培养过夜。8. 1/50 比例接入新的 LB 培养基(含相应质粒抗生素,20μg/ml 氯霉素,0.5 mg/ml L-阿拉伯糖)37 ℃剧烈振荡培养至菌体密度 OD600 约 0.3(约 2h)。9. 加入终浓度 2 ng/ml 四环素(诱导 chaprone 伴侣蛋白表达),37℃剧烈振荡培养至 OD600 约 0.5(约 2~4h)。10. 加入适量 IPTG(0.1-1 mM), 15℃振荡培养 24h(培养摇床无法制冷条件下,室温诱导 8~12h)。11. 4,000 rpm 室温离心 15 min,收集细胞,进行蛋白表达和可溶性表达分析。
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