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HotStart Bst4.2
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25
12 个月
上海西格
-20℃
1600U /10KU
描述:
Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 经酶电子重构架和进化筛选(in silico Design & invitro Evolution),其为Bst4.0 的升级品,通用于 DNA 或 RNA 的 LAMP 或RT-LAMP 扩增。性能提升包括 :
(1 )Bst 4.2 全系包含 热启动Aptamer,该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>95%,在>60℃时 1min 内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,并大幅降低了低温条件下的非特异扩增;
(2)反应温度提升到 70℃,大幅降低引物 Dimer 的形成,提高扩增特异性,并使得粗样品核酸释放更加充分;
(3)全系包含 Helicaser,因此,允许在不使用 F3/B3 引物的情况下进行 LAMP 扩增(easy LAMP),并允许 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增,并使得扩增均一性大幅提升。注意: HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase(8U/μl)不含有甘油,可用于冻干体系的建立。储存:长期保存请置于-20℃以下(12 个月有效);制品反复冻融 10 次不影响性能,但应避免反复冻融;制品由于含有高浓度的糖组分,-20℃保存的酶制品,在融化时可能会有结晶物,此时在 30℃的温度下融化,过高的温度可能会导致热启动性能下降。一经融化推荐置于 2-8℃保存,在此条件下制品稳定储存 6 个月。特殊说明:(1) Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 扩增时的推荐反应温度为 65-70℃,最佳反应温度为 70℃。因此其可完全替代 的 Bst4.0 系列,用于标准 LAMP的扩增。(2) 由于 Helicaser 的反应温度为 70℃,因此在进行eLAMP 扩增时,反应温度为 70℃。1. 标准 LAMP 扩增1.1 10xLAMP Primer Mix:FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4μM each; F3/B3=2 μM each1.2 配制 LAMP 反应体系10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl100mM Mg2+1.5 μldNTP Mixture(10 mM each) 3 μl10xLAMP Primer Mix 2.5 μlHotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl模板 DNA/RNA X μlddH2O 到总体积 25 μl1.3 反应体系配好后,置于 65-70°C 反应 20~30min。2. eLAMP 扩增2.1 10xeLAMP Primer Mix : FIP/BIP=8 μM each;LF/LB=4 μM each。注意:eLAMP(easy LAMP)为去除 F3/B3 引物的方法,为 Bst4.2 系列专用的使用策略,对于大多数引物组,在Helicaser 的加持下,扩增速度几乎不受影响。如引物扩增效率低,可提高 FIP/BIP 浓度到 12~16uM。2.2 配制 eLAMP 反应体系10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl100mM Mg2+1.5 μldNTP Mixture(10 mM each) 3 μl10xeLAMP Primer Mix 2.5 μlHotStart Bst 4.2(8U/μl) 1 μl模板 DNA/RNA X μlddH2O 到总体积 25 μl2.3 eLAMP 的扩增温度为 70°C,反应 20~30min。其它注意事项(1) 制品中包含高浓度的盐组分,使用时做好个人防护,防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入,一旦接触或吸入,请用大量的清水冲洗。(2) 防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
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