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pET-28a(+) Seam
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XG-P2937
12 个月
上海西格
2-8°C
20 μl
pET-28a(+)载体为高水平的原核表达载体,在N端含有His-Tag, Thrombin(凝血酶)酶切位点,T7-Tag,在C端具有His-Tag。本产品提供pET-28a(+)经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,可用无缝克隆技术将单个或多个DNA片段组装到载体上。无缝克隆技术可在重组酶的作用下,只需一步反应,便可将片段克隆到任何载体中的任意位置,得到重组质粒。无缝克隆技术作为一种非常强大的克隆技术,具有快速、简便、高效、多片段组装和定向克隆等特点,用于单个 DNA 片段的克隆,多个 DNA 片段组装克隆以及多位点突变构建等实验目的。产品特点:1. pET-28a载体为原核表达载体,具有N-His, N-Thrombin, N-T7和C-His。2. pET-28a经EcoRⅠ酶切后的线性化载体,省时省力。3. 无缝克隆技术只需要简单的 PCR 扩增就可以制备片段DNA。4. 可以克隆长片段和多片段DNA。5. 简单、快速、精确、定向克隆。操作步骤:1. pET-28a(+)线性化载体使用方法:(1) pET-28a(+)线性化载体当做克隆载体使用,可以在扩增PCR产物的上游引物 5’端添加序列:GCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATG(需要5’端HIS标签时)或者AACTTTAAGAAGGAGATATACCATG(不需要5’端HIS标签时)下游引物 5’端添加序列:CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAG(需要3’端HIS标签时)或者CTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTCGAGTCA(不需要3’端HIS标签时)通过无缝克隆连接到pET-28a(+)中。(1) 测序引物T7: 5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3'T7t: 5'-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3'-2pET-28a(+)线性化载体为 EcoRⅠ酶切后的线性化载体,图谱及多克隆位点见下图。
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