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pBM16K Toposmar
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12 个月
上海西格
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保存条件:-20℃保存产品介绍: pBM16K Toposmart克隆试剂盒利用痘苗病毒的拓扑异构酶I(Topoisomerase I)的切割再连接的特点将片段克隆到载体中。不仅适用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶扩增的平末端PCR产物,也可克隆由Taq、Taq plus、Tth和klenTaq等DNA聚合酶扩增的带A尾的PCR产物。试剂盒中的pBM16K载体为线性化的质粒。可以用引物M13F和M13R进行菌落PCR鉴定阳性克隆。产品特点:(1) 连接反应仅需 5 分钟。(2) 适用于平末端 PCR 产物和带 A 尾的 PCR 产物。(3) 载体采用了新的制备工艺,零背景,无需蓝白斑筛选。(4) 克隆位点两旁都有 SmaI和EcoRV 酶切位点,适合单酶切鉴定。(5) 载体具有卡那霉素抗性。
PCR反应基本步骤:一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成,每个循环包括以下3个步骤:变性(Denaturation):利用高温(93-98℃)使双链DNA分离。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前,通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离,仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟,接下来PCR仪就控制温度进入循环阶段。退火或称接合,复性(Annealling):在DNA双链分离后,降低温度使得引物可以结合于单链DNA上。此阶段的温度通常低于引物熔点5℃。错误的退火温度可能导致引物不与模板结合或者错误地结合。该步骤时间1-2分钟。延伸(Extension):DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。传统的Taq估计合成1000bp/min、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。PCR 反应需要使用哪些试剂?一、模板DNA:PCR反应需要模板DNA,如从细胞、组织、血液中提取DNA等;二、引物:PCR反应的两个引物,分别与模板DNA的两端配对扩增所需的特定区域,引物也可以合成为TA克隆等过程中使用到的引物;三、dNTPs:PCR反应中需要四种dNTPs,包括脱氧腺苷酸(dATP)、脱氧胸苷酸(dCTP)、脱氧鸟苷酸(dGTP)、脱氧胞嘧啶酸(dTTP),用于细胞分裂、DNA合成等生物学过程,用于PCR扩增的模板DNA链的延伸和扩增;四、Taq DNA聚合酶:PCR反应需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,还有一些其他种类的聚合酶如PFU、Phusion等,用于扩增DNA链;五、PCR buffer溶液:对PCR反应具有缓冲作用,调节反应pH,硫代硫酸氢盐SDS、小分子有机化合物如甲醛,可增强PCR反应特异性,从而提高反应效率;六、酶切体系:PCR扩增往往涉及到重组、构建和测序等等实验步骤,常常需要进行酶切操作。七、MARK:一种分子量标准,用来判别DNA片段大小的工具。八、DNA纯化试剂盒:用于纯化PCR反应产物; 公司供应的相关产品:
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