TF-350-L-R-S AXYGEN 300ul盒装灭

各类细胞培养小结

表面的透明软骨，以磷酸缓冲液（PBS含青霉素、链霉素各100U/L）冲洗2遍，将软骨剪切成1－3mm3 左右碎块，0.25%胰蛋白酶先消化30-35分钟，PBS浸洗2遍；后置于50ml玻璃培养瓶，加0.1%Ⅱ型胶原酶(DMEM配制)，37消化3.5－4.5小时，每小时置37℃恒温振荡箱振荡5min。直到软骨块大部分呈肉眼可见的絮状物，倒置显微镜下观察，软骨细胞大部分分离后，以弯头吸管轻轻吹打，细胞悬液以1200r/min离心7分钟，弃上清，以含10％新生牛血清DMEM的培养液终止消化，离心弃上清

分子生物学常用实验技术（page 3)

中的DNA,使其沉积在滤膜上。该法的优点是快速,在30 分钟内就能从正常厚度(4-5mm)和正常琼脂糖浓度( 1、材料： 待检测的DNA，已标记好的探针。 2、设备： 电泳仪，电泳槽，塑料盆，真空烤箱，放射自显影盒，X-光片，杂交袋，硝酸纤维素滤膜或尼龙膜，滤纸。 3、试剂： (1)10mg/ml 溴化乙锭（EB）。 (2)50×Denhardt's 溶液：5g Ficoll-40, 5g PVP, 5g BSA 加水至500ml,过滤除菌后于-20℃储存。 (3)1×

实验小窍门

0.  25%胰酶消化.  含10%新生牛血清的PR MI1640培养液悬浮细胞.  制成单细胞悬液.  调整细胞浓度为1.  5×104个/  Ml.  96孔板每孔中加入200 ul.  细胞的边缘孔用无菌PBS填充。   2）  37 ℃.  5%CO2培养箱中培养过夜.  无血清PR MI1640培养基饥饿细胞24小时。   3）  细胞培养液换成含1%新生牛血清的PR MI1640培养液200 ul.  并加入不同的干预因素.  每个浓度组设5个复孔