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脯氨酸(PRO)-检测试剂盒(茚三酮微板法)

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  • 2025年07月12日
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    脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法)
    产品简介:
    脯氨酸(Proline,Pro)是一种环状的α-亚氨基酸,呈中性,等电点为 6.30,水中溶解度比任何氨基酸都大,25℃时 100g 水中可溶 162g 左右,易潮解不易得结晶,有甜味。脯氨酸与茚三酮溶液共热,生成黄色化合物,一旦进入肽链后,可发生羟基化作用,从而形 4-
    羟脯氨酸,是组成动物胶原蛋白的重要成分,羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中,尤其与
    细胞壁的形成有关,在正常情况下脯氨酸含量较低,但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等),
    常有脯氨酸的明显积累,即积累指数与植物的抗逆性有关,在临床、生物材料、工业等方面
    均有广泛应用。脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中,前者与酸性茚三酮共热发生反应,产生稳定的红色产物,以酶标仪测定 520nm处吸光度值,在一定浓度范围内颜色深浅与脯氨酸浓度成正比。该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量,仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
    产品细节图片1
    操作步骤(仅供参考)
    1、配制 PRO Lysis buffer(1×):取 1 份 PRO Lysisbuffer(5×)加 4 份去离子水混匀即成。
    2、配制茚三酮显色液: 准确称取 0.75g 茚三酮,溶解于 30ml 茚三酮稀释液中,70℃加热搅拌至完全溶解(也可用超声助溶),混匀,即为茚三酮显色液。4℃避光备用,48h 有效。
    注意:茚三酮稀释液具有一定腐蚀性,请小心操作。如果 2 天内用不完,可以称取一定
    量的茚三酮,加入茚三酮稀释液使终浓度为 2.5%即可。
    3、准备样品:
    ①植物样品:取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,切碎,迅速称取 0.5g,加入 5ml PRO
    Lysis buffer(1×)后匀浆或研磨,沸水浴 10min(期间经常摇动),混匀,用滤纸或纱布过
    滤,滤液即为脯氨酸提取液,4℃保存备用。
    ②血浆、血清和尿液样品:血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测
    定,-20℃冻存,用于脯氨酸的检测。
    ③细胞或组织样品:取恰当细胞或组织裂解液,如有必要用 PRO Lysis buffer(1×)进行
    适当匀浆,留取上清即脯氨酸提取液,用于脯氨酸的检测。4℃保存备用,3 天有效。
    ④高活性样品:如果样品中含有较高浓度的脯氨酸,可以使用 PRO Lysis buffer(1×)进
    行恰当的稀释。
    4、配制系列脯氨酸标准溶液:取出脯氨酸标准(100μg/ml)恢复至室温后,用去离子水稀释
    为脯氨酸标准(10μg/ml)。
    5、PRO 加样:按照下表设置空白管、标准管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡。如果样品中的脯氨酸浓度过高,可以减少样品用量或适当稀释后再进行
    测定,样品的检测最好能设置平行管。
    6、PRO 测定:迅速冷却加入 0.6~0.9ml 甲苯或二甲苯,振摇 30s,静置片刻,取上清液转移至新的离心管或试管,3000r/min 离心 10min,取上清液 200μl 分别加至 96 孔板中,空白管调零,520nm 处用酶标仪测定标准管和测定管吸光度注:加入甲苯或二甲
    苯的量前后应统一;空白管和标准管不用离心,可直接取上清液测定。
    计算:以系列脯氨酸标准(1~7 号)浓度(μg/ml)为横坐标,以对应的吸光度为纵坐标,制作标准曲线,根据测定管的吸光度进而计算其脯氨酸浓度。根据如下公式计算具体样品中脯氨酸的含量:
    植物组织样品 PRO(μg/g)=C×VT/W
    式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸浓度(μg/ml)
    VT=脯氨酸提取液总体积(ml)
    W=样品鲜重(g)
    血清、尿液等样品 PRO (μg/ml)=C×N
    式中:C=从标准曲线上查得的脯氨酸浓度(μg/ml)
    N=稀释倍数
    注意事项:
    1、 实验材料应尽量新鲜,如取材后不立即使用,应存于 4℃。
    2、 PRO Assay buffer 应密闭保存,防止挥发。
    3、 PRO Lysis buffer(5×)、PRO Assay buffer 和茚三酮稀释液都有一定腐蚀性,应小心
    操作。
    4、 茚三酮显色液配制后可 4℃避光保存 48h 有效。建议尽快使用或用多少配多少。
    5、 本检测方法,资料中大多建议使用甲苯进行抽提反应后的红色色素,因甲苯管制或不易获得,经我公司对比实验及检测结果发现,二甲苯可有效替代甲苯进行抽提。
    6、 因甲苯或二甲苯都有一定危害性,使用时应在通风橱中小心抽取,用后应及时盖紧瓶盖,防止挥发。
    7、 如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但应考虑分光光度计的最小检测体积。
    8、 测定时不能使用塑料的酶标条或比色皿,因甲苯或二甲苯等有机溶剂与其反应,使测定结果不准确。
    9、 所测样本的脯氨酸浓度过高,应用 PRO Lysis buffer(1×)稀释样品后重新测定。
    10、 沸水浴的反应过程中,应使用密封性能好的带螺旋盖子的离心管,防止因密封性不好
    而导致水分进入;不宜使用扣盖离心管,避免因爆沸使得盖子崩开而导致水分进入;此
    二种原因都可能导致测定结果不准。
    11、 沸水浴的反应过程中,人员不应随意接近,防止液体喷出,导致伤人事故的发生。
    12、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
    有效期:6 个月有效。4℃运输,4℃保存。

    脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮微板法)

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