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信帆生物
(测脂蛋白脂酶 LPL 及肝脂酶 HL)
二﹑操作步骤:
1、样本的前处理:
①、称取组织的重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比
例,加入 9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀
浆,制成 10%组织匀浆,2500转/分,离心 10 分钟,
取上清液待测。
②、血清(浆)样本直接取样进行测定。
2、操作表:
吸取下层抽提液时最好采用玻璃注射器及硬膜外麻醉针心
针套进行操作。
注:详细操作步骤:
1、充分混匀抽提 2 分钟~5 分钟(用秒表计时)。在抽提前用
塞子或薄膜将试管封口,在抽提过程中注意观察试管中液
体上下有无混匀,在一边混匀时一边要观察混匀液上下颜
色否均匀一致,如果发现颜色上深下浅则需要将管子提起
来再放下混匀,使得在混匀过程中混匀液上下颜色一致。
混匀 2 分钟后,观察混匀液是否分层,如果立即分层且管
底呈透明则需继续混匀不立即分层或管底为乳白色状为止
(空白和标准管除外)。
2、吸取试剂六抽提液时必须用玻璃移液管进行操作。
3、抽提完后以 3500 转/分,离心 10 分钟,若发现下层液体呈
半凝固状态、凝固层较厚或下层液体不足 1mL 时,则可用
小玻棒或硬膜外麻醉针心轻轻搅拌下层液体后再次离心,
直至分层清楚。
4、用注射器接上硬膜外麻醉针套吸取上层液体及凝固层并弃
之。
5、另取一个注射器及硬膜外麻醉针心针套(不可以用注 2、
注 3 中的注射器及针心针套),在每吸取一个测定管前先
用无水乙醇涮洗 2~3 次,再用试剂六抽提液涮洗 2~3
次。然后将硬膜外麻醉针心插入针套中,小心插入下层抽
提液中,拔出针心,接上注射器吸取下层抽提液 1.3~
1.5mL 至另一试管中。(这样可避免上层液体及凝固层混
入下层液体中,否则会影响结果。)若偶然发现抽提液有
雾状混浊,可放入 37℃水浴 1~2 分钟,雾状混浊即可消
失。
6、再从上述试管中用移液器准确吸取 1mL 下层抽提液加入另
一试管中,加显色剂进行显色。
7、先用无水乙醇将比色皿洗干净后,再将试剂六倒入比色皿
中进行调零。
8、操作工程中只能用玻璃管,不能用塑料材质的试管代替。
以上八点为实验成败的关键。
四﹑测试原理:
脂蛋白脂酶(LPL)和肝脂酶(HL)可分解甘油三酯(TG)
并水解为甘油及游离脂肪酸(FFA),用铜试剂测定生成的
游离脂肪酸(FFA)的量即可分别计算脂蛋白脂酶(LPL)和肝
脂酶(HL)的活性。
肝 脂 酶 为 糖 蛋 白 , 其 活 性 不 需 要 载 脂 蛋 白
(apolipoprotin)CⅡ激活及一些离子的激活,不受高浓度盐
及鱼精蛋白的抑制,利用此特点即可分别计算脂蛋白脂
酶(LPL)和肝脂酶(HL)的活性。
五﹑测定意义:
脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase LPL)存在肝外组织
毛细血管内皮细胞表面,它主要催化血浆中乳糜微粒
(CM)和极低密度脂蛋白(VLDL)中的甘油三酯
(TG)水解,在乳糜微粒(CM)及极低密度脂蛋白
(VLDL)的降解中发挥重要作用。
肝脂酶(Hepatic Lipase HL)则仅存在肝内皮细胞
表面,它主要在中密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白
(HDL)代谢中起重要作用。
总脂酶测试盒
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文献和实验人乙酰胆碱脂酶受体抗体(AchR-Ab)酶联免疫分析(ELISA)
人 乙酰胆碱脂酶受体抗体( AchR-Ab ) 酶联免疫分析(ELISA ) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中乙酰胆碱脂酶受体抗体(AchR-Ab )的 含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中人乙酰胆碱脂酶受体抗体( AchR-Ab ) 水平。 用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入抗乙酰胆碱脂酶受体
静脉血得到血浆再测LPL活性。一般静脉注射肝素后血浆总脂酶活性的1/3为LPL,剩余的几乎都是肝脂酶(HTGL)。目前还可用高浓度盐酸或鱼精蛋白选择性抑制LPL活性的方法测定其活性。最近报道,还可用LPL或HTGT抗体进行活性检测。
GTP结合蛋白(GTP binding protein, G蛋白)
与GTP或GDP结合的蛋白质,又叫鸟苷酸结合调节蛋白(guanine nucleotide-binding regulatory protein)。从组成上看,有单体G蛋白(一条多肽链)和多亚基G蛋白(多条多肽链组成)。G蛋白参与细胞的多种生命活动,如细胞通讯、核糖体与内质网的结合、小泡运输、蛋白质合成等。 G蛋白偶联系统中的G蛋白是由三个不同亚基组成的异源三体,三个亚基分别是α、β、γ, 总相对分子质量在100kDa左右, β亚基为36 kDa左右, γ亚基
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