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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
42
- 检测方法:
微量法、可见分光光度法
- 规格:
100管/48样/50管/24样
| 规格: | 100管/48样 | 产品价格: | ¥910.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50管/24样 | 产品价格: | ¥487.5 |
| 产品名称 | 苯胺4羟化酶(AH)测试盒 |
| 规格 | 100管/48样 50管/24样 |
| 测试方法 | 微量法、可见分光光度法 |
| 货号 | LZ-S01264 |
商品介绍:
测定意义
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。AH在P450酶系中相当于CYP2E1亚型,CYP2E1不仅参与了药物的代谢,而且还能催化多种前致癌物和前毒物的活化过程。
测定原理:
AH催化苯胺羟化后产生的4-氨基酚,进一步转变为酚-吲哚复合物,在630nm处有特征吸收峰;通过测定630nm吸光度增加速率,来计算AH活性。
自备仪器及用品:
普通离心机、超速离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、双蒸水和冰。
注意事项:
1.阳性对照H2O2一般使用浓度为100 μM (推荐浓度50-200 μM,具体依细胞类型而定) 。通常刺激后30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高,可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强,可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
2.实验过程中,如果阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1:2000-1:5000 稀释荧光探针DCFH-DA,使DCFH-DA的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在15-60 min 内适当进行调整,尽量缩短读片时的曝光时间,并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
活性氧阳性对照 (H2O2) 仅仅用于作为阳性对照的样品,并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
3.探针装载后,一定要洗净未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
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文献和实验亦称为氢氧化酶,是加氧酶的一种,是催化利用氧分子形成氢氧化物(酚、醇)反应的酶。所谓单(加)氧酶,除底物外,还需要电子供体( NADP-H) AH O2 NADPH H → AOH NADP H2 O 在从苯丙氨酸合成酪氨酸,(苯丙氨酸羟化酶),从苯胺合成氨基苯酚(芳基 -4-羟化酶)。从鲨烯(三十碳六烯 squalene)合成类固醇(鲨烯羟化酶)以及进行类固醇的羟基化(各种类固醇羟化酶)等的反应中,都存在着羟化酶。在羟化酶中,多数以 P-450
A4-C4B2]完全相同,只有DR前者为9,后者为8,DQ前者为9,后者为6,这表示,中日两个人群的AH具有极大的相似性,而在HLA-Ⅱ类外才有分化。撒丁岛人(Sardinian)HLA-EH很受人们的重视,在意大利的撒丁岛,15%的人的EH为HLA-[A30-Cw5-B18-BfF1-DR3-DR52-DQ2],远远超出至今所知的世界人群,而且其C4B与21A基因RELP缺失,即这一单体型为C4及21羟化酶基因重复的祖传单体型。
上,故称加单氧酶系(monooxygenase)。由于在反应中一个氧原子掺入到底物中,而一个氧原子使NADPH氧化而生成水,即一种氧分子发挥了两种功能,故又称混合功能氧化酶(mixed function oxidase)。亦可称为羟化酶。加单氧酶系的特异性较差,可催化多种有机物质进行不同类型的氧化反应。 (1)加单氧酶系的组成 加单氧酶系由NADPH,NADPH�细胞色素P450还原酶及细胞色素P450组成。NADPH-细胞色素P450还原酶以FAD和FMN为辅基。二者比例
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