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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商:
上海联祖
- 库存:
40
- 检测方法:
微量法、可见分光光度法
- 规格:
100管/96样/50管/48样
| 规格: | 100管/96样 | 产品价格: | ¥715.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 50管/48样 | 产品价格: | ¥390.0 |
| 产品名称 | NADPH细胞色素C还原酶(NCR)测试盒 |
| 规格 | 100管/96样 50管/48样 |
| 测试方法 | 微量法、可见分光光度法 |
| 货号 | LZ-S01262 |
商品介绍:
测定意义
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。
测定原理:
NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素C,还原型细胞色素C在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。
自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
注意事项:
1.阳性对照H2O2一般使用浓度为100 μM (推荐浓度50-200 μM,具体依细胞类型而定) 。通常刺激后30 min-4 h可以观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞,活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高,可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果荧光信号过强,可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。
2.实验过程中,如果阴性对照细胞荧光也比较强,可以按照1:2000-1:5000 稀释荧光探针DCFH-DA,使DCFH-DA的终浓度为 2-5 μM。探针装载的时间可在15-60 min 内适当进行调整,尽量缩短读片时的曝光时间,并且试验组、对照组曝光时间需保持一致。
活性氧阳性对照 (H2O2) 仅仅用于作为阳性对照的样品,并非所有试验组样品中都需加入活性氧阳性对照。
3.探针装载后,一定要洗净未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
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文献和实验问:有关测定醛糖还原酶活性时的反应体系有以下几个疑问:1、67mmol/l钠钾磷酸盐缓冲液如何配置?也有人 用50mmol/l的磷酸钾缓冲液二者哪一种更好。2、整个反映体系配置须注意哪些问题?最后加DL-甘油醛还是NADPH。3、NADPH标准曲线绘制分别用多大浓度?请各位指教,谢谢。答:在测定酶的活性时,有时由于酶的纯化不足,导致影响结果,在检测醛糖还原酶活性时要注意以下几点:(一)其它酶和物质的干扰如组织匀浆中往往含有NADH-细胞色素C还原酶,它将干扰各种还原酶的测定。临床酶测定中最典型
)F344系 1.形成: ⑴起源:1920年由哥仓比亚大学肿瘤研究所Curtis培育,1949年引入Heston之后又到NIH,1950年Bethesde将其繁殖51代,最后完成繁殖的不是Dunning就是NIH。 ⑵近交代数:F86。 2.毛色:白化(a,c,h)。 3.主要特性: ⑴免疫不特性:原发和继发性的脾脏红细胞的免疫反应性低。特殊活动性能高,但与远交系Sprague-Dewley大鼠比较,其NADPH-细胞色素C还原酶的诱发力低。
大学肿瘤研究所科尔提斯(Curtis)培育,我国从美国NIH引进。 毛色:白化 主要特性:①寿命:10同龄时雄鼠体重达到190一280g,雌鼠达120~190g。平均寿命雄鼠为3I个月,雌鼠为29个月。②免疫学方面:原发性和继发性脾红细胞免疫反应性低,其NADPH-细胞色素C还原酶的诱发力较SD大鼠为低。③生理学方面:旋转运动性低;血清胰岛素含量低;肝结节状增生的发生率为5%;雄鼠乙基吗啡和苯胺的肝代谢率高,可作苯酮尿症动物模型;对高血压蛋白质的产生有抵抗力;脑垂体较大;乙烯雌酚吸收快且易引起死亡;戊巴
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