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100
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信帆生物
(Total Phenols Kit,TP分光光度法50T/24 样)
一、测定原理:
在碱性条件下,酚类物质将钨钼酸还原,产生蓝色化
合物,在760nm 处有特征吸收峰,测760nm 处的吸光值,
即可得样品总酚含量。
二、仪器设备(自备):
烘箱、粉碎仪、40目筛、超声破碎仪、研钵、离心机、
可见分光光度计、1mL玻璃比色皿
三、试剂组成:(24T)
提取液:60%乙醇水溶液,自备;
试剂一:黄色液体8mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:无色液体15mL×1 瓶,4℃保存;
试剂三:2000μmol/L标准品1mL×1 瓶,无色液体,4℃保
存;500μmol/L标准品配置:取2000μmol/L标准
品按1:3的比例(V:V)加入3倍体积的60%乙醇水
溶液配置,现用现配。
四、操作步骤:
1、总酚提取:
干样提取:将样本烘干至恒重,粉碎,过40目筛之后,
称取约0.1g,加入2mL提取液,用超声提取法进行提取,
超声功率300W,破碎5秒,间歇8秒,60℃提取30min。4000
转/min离心10min,取上清液待测。
鲜样提取:将新鲜或冷冻保存的植物鲜样,用液氮研
磨成粉,在带盖离心管中称取植物粉末约0.1g,加入2mL
提取液,盖紧,漩涡混匀抽提2~3分钟后,置于60℃提取
30min,4000转/min离心10min,取上清液待测。
注:上清液在测试前需取一个正常组的样本上清和一个
预期差异较大的样本上清进行预试以确定最佳取
样浓度(测定管OD-对照管OD≤0.9)。
六、测定意义:
植物酚类物质具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作
用,具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化
妆品、食品、医药等领域。
七、注意事项:
1、试剂一对皮肤有一定的刺激性,请操作时做好防护措施。
2、本实验可自行制作标准曲线计算,也可按照操作表操
作后按计算公式计算,不影响结果。
3、样本根据客户自己要求烘干或用鲜样都可,结果单位
用μg/g组织表示时应乘以相应植物总酚平均分子质量。
4、室温25℃时,可直接在室内条件下反应。
5、反应时尽量避免强光照射。
6、本试剂盒仅用于科研。
植物总酚检测试剂盒
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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力,可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合,将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。 由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失,细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核,搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A.悬浮细胞: 按照实验方案进行凋亡诱导,300 g离心5 min,弃上清,收集细胞,用PBS洗涤细胞一次,轻轻重悬浮细胞并计数。 取1~5 ×
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