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信帆生物
(微板法 48T)
二、操作步骤:
1、样本前处理:准确称取植物组织重量,按重量体积比 1:9
加入 9 倍体积的试剂五应用提取液(如 0.1g 植物组织
+0.9mL 的试剂五应用提取液),剪碎后用内切式匀浆机冰
水浴匀浆, 8000~10000 转/分,每次 10~15 秒,间歇 30
秒,共 3~5 次,再将匀浆吸入到离心管中,3500~4000
转/分,离心 10 分钟,取上清待测。
2、 编号:对赠送给你的盖子上带孔的离心管进行编号,并用
它加样加试剂进行操作。
四、注意点:
1、部分样本中 MDA 含量较低,可将操作表中的空白管、标
准管、测定管的取样量均加大到 100μL 进行测定。
2、附送盖子上带孔的 EP 管 60 个,直接编号后用于操作。
3、水浴时间及温度要固定,反应时间到后立即用流水冷却。
冷却后呈色稳定,12 小时内吸光度基本不变。
4、沸水浴 20 分钟,流水冷却后,转入 96 孔板中的液体量
一定要准确,并且不能有气泡。
如有气泡可以放一段时间等气泡消失后再测。(最好先将
酶标板空板进行扫描)
5、如没有酶标仪,可以用微量比色皿在分光光度计上进行
测定。
五、测试原理
过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比
妥酸(TBA)缩合,形成红色产物,在 532nm 处有最大吸收峰。
因底物为硫代巴-比-妥酸(Thibabituric Acid TBA)所以此法
称 TBA 法。
六、测定意义:
机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基,后者能攻击
生物膜中的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid,
PUFA),引发脂质过氧化作用,并因此形成脂质过氧化物。
如:醛基(丙二醛 MDA)、酮基、羟基、羰基、氢过氧基或
内过氧基,以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不仅把活
性氧转化成活性化学剂,即非自由基性的脂类分解产物,而
且通过链式或链式支链反应,放大活性氧的作用。因此,初
始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成,这些分解
产物中,一些是无害的,另一些则能引起细胞代谢及功能障
碍,甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸
(PUFA)的过氧化引起细胞损伤,而且还能通过脂氢过氧
化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试 MDA 的量常常可
反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤的程
度。
MDA 的测定常常与 SOD 的测定相互配合,SOD 活力的
高低间接反应了机体清除氧自由基的能力,而 MDA 的高低
又间接反应了机体细胞受自由基攻击的严重程度,通过 SOD
与 MDA 的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生
产的发展。
植物丙二醛(MDA)测试盒
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