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100
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信帆生物
(微板法 48T)
一、测定原理:
SPS 催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,再用蔗糖磷酸
与间苯二酚反应生成的物质在 480nm 处测定吸光值来测
定其含量,从而可以计算 SPS 的活性。
二、检测意义:
蔗糖磷酸合成酶(Sucrose Phosphate Synthase,SPS)
主要在绿色光合器官中进行蔗糖合成,在贮藏器官中蔗
糖磷酸合成酶活性则很低。但有实验证明,在蔗糖源池
的蔗糖流通中,包含着一个无效的循环,即蔗糖同时合
成与分解,此时蔗糖磷酸合成酶活性很强。因此蔗糖磷
酸合成酶在库组织中的作用不可低估,在光合与非光合
组织中蔗糖磷酸合成酶活性被代谢产物与可逆的蛋白质
磷酸化所调节。
四、样本前处理:
①、组织样本:将植物组织用生理盐水漂洗干净,滤纸
吸干,准确称重,按重量(g):体积(ml)=1:9 的
比例(水分含量多的样本可用 1:2 的比例)加入提
取液,冰水浴条件下匀浆制成 10%的匀浆液,4000
转/分,离心 10 分钟,取上清待测。(如需测蛋白浓
度,蛋白定量试剂盒本所有售)
②、液体样本:直接测定。如有浑浊,4000 转/分离心 2
分钟后取上清液待测。
七、注意事项:
1、测试前尽量选 1-2 个样本做预试,以确定样本适宜浓
度及实验流程;
2、制备样本上清时可按实际情况制备所需样本浓度,提
取液加入比例可按 1:5~10 进行;
3、如果自己制备标准曲线,则所测样本数降低;如果不
做标准曲线,可按公式直接计算;
4、样本蛋白浓度可用本公司的 A045 系列(BCA 法或考
马斯亮蓝法)进行测定;
5、若△A 偏小(或在零附近徘徊),可增加样本加样体
积(如 30μL,则加入试剂三体积相应减少),或提高
样本浓度(如 0.2g 加 1mL 提取液提取),或延长 37℃
反应时间(如 40min,计算时相应的变量代入计算公
式计算);
6、如样本△A 值大于 0.6,则需将样本上清稀释以后进
行测定;
7、95℃水浴时,可将离心管口缝隙用封口膜封紧后进行;
8、每个样本都需设定一个对照管。
蔗糖磷酸合成酶(SPS)测试盒
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文献和实验联有ATP的磷酸键断裂的酶类。例如,谷氨酰胺合成酶、氨基酸:tRNA连接酶等。 二、酶的命名 (一)习惯命名法 1.一般采用底物加反应类型而命名,如蛋白水解酶、乳酸脱氢酶、磷酸己糖异构酶等。 2.对水解酶类,只要底物名称即可,如蔗糖酶、胆硷酯酶、蛋白酶等。 3.有时在底物名称前冠以酶的来源,如血清谷氨酸-丙酮酸转氨酶、唾液淀粉酶等。 习惯命名法简单,应用历史长,但缺乏系统性,有时出现一酶数名或一名数酶的现象。 (二)系统命名法 鉴于新酶
指生物体内由葡萄糖等单糖合成糖原的过程。为糖原分解的逆过程。将更普遍的用低分子的乳糖等通过糖酵解的逆过程而生成糖原的过程称糖异生以资与之区别。动物主要在肝脏或肌肉中进行,为能源储藏的一个主要过程。食物消化后由消化器官吸入血液中的葡萄糖,通过肝门脉而运到肝脏,在那里在已糖激酶和 ATP的作用下先磷酸化成 6-磷酸葡萄糖,再经 1-磷酸葡萄糖而成 UDP葡萄糖,再在糖原合成酶的作用下生成糖原。此时形成α- 1, 4-糖苷键,但其α- 1, 6键由称为脱支酶的一种转糖苷酶的协同
的积累会反馈抑制合成蔗糖的磷酸蔗糖合成酶sucrose phosphate synthetase,SPS)的活性,使F6P增加。而F6P的积累,又反馈抑制果糖1,6-二磷酸酯酶活性,使细胞质以及叶绿体中磷酸丙糖含量增加,从而影响CO2的固定;(2)淀粉粒的影响。叶肉细胞中蔗糖的积累会促进叶绿体基质中淀粉的合成与淀粉粒的形成,过多的淀粉粒一方面会压迫与损伤类囊体,另一方面,由于淀粉粒对光有遮挡,从而直接阻碍光合膜对光的吸收。三 外部因素 (一)光照光是光合作用的动力,也是形成叶绿素、叶绿体以及正常叶片
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