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信帆生物
(微板法 48T)
一、 测定原理:
SS催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖,
再用蔗糖与间苯二酚反应生成的物质在 480nm 处测定吸
光值来测定蔗糖含量,从而可以计算 SS 的活性。
二、 检测意义:
蔗糖合成酶(Sucrose Synthase,SS)既对蔗糖合
成起主要作用,又在根部蔗糖贮藏过程中起重要的调节
作用,根中蔗糖贮藏开始的特点是蔗糖合成酶的活力出
现并随之增高。通过蔗糖合成酶的作用,当蔗糖合成酶
分解活性大于其合成活性时,蔗糖即被分解,形成大量
同化器官建成需要的基础物质;而当蔗糖合成酶合成活
性大于其分解活性时,则有利于蔗糖的形成。所以在植
物的生育过程中,蔗糖合成酶活性的调节在蔗糖代谢分
配上显得尤为重要。
三、样本前处理:
①、组织样本:将植物组织用生理盐水漂洗干净,滤纸
吸干,准确称重,按重量(g):体积(ml)=1:9 的
比例(水分含量多的样本可用 1:2 的比例)加入提
取液,冰水浴条件下匀浆制成 10%的匀浆液,4000
转/分,离心 10 分钟,取上清待测。(如需测蛋白浓
度,蛋白定量试剂盒本所有售)
②、液体样本:直接测定。如有浑浊,4000 转/分离心
2 分钟后取上清液待测。
七、注意事项:
1、测试前尽量选 1-2 个样本做预试,以确定样本适宜浓
度及实验流程;
2、制备样本上清时可按实际情况制备所需样本浓度,提
取液加入比例可按 1:5~10 进行;
3、如果自己制备标准曲线,则所测样本数降低;如果不
做标准曲线,可按公式直接计算;
4、样本蛋白浓度,可用本公司的 A045 系列(BCA 法或
考马斯亮蓝法)进行测定;
5、若△A 偏小(或在零附近徘徊),可增加样本加样体
积(如 30μL,则加入试剂三体积相应减少),或提高
样本浓度(如 0.2g 加 1mL 提取液提取),或延长 37℃
反应时间(如 40min,计算时相应的变量代入计算公
式计算);
6、如样本△A 值大于 0.6,则需将样本上清稀释以后进
行测定;
7、95℃水浴时,可将离心管口缝隙用封口膜封紧后进行;
8、每个样本都需设定一个对照管。
蔗糖合成酶(SS)测试盒
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