乙酰胆碱酯酶(AChE)测定试剂盒

乙酰胆碱酯酶(AChE)测定试剂盒
（比色法）
一、试剂组成及配制(50 管/24 样)：
试剂一：标准品，粉剂×3 支，4℃保存 6 个月。1μmol/mL
标准品应用液配制：取标准品一支加生理盐水
10mL 混匀，现用现配。
试剂二：底物，粉剂×2 支，4℃保存 6 个月。
底物缓冲液配制：用时每支粉剂加生理盐水
20mL，制备成底物缓冲液，4℃保存两周。
试剂三：显色剂贮备液，3mL×1 支，4℃保存 6 个月。
显色应用液配制：用时按照显色剂贮备液：生理
盐水=1︰9 稀释，配成显色应用液。按需配制，
也可一次配制 30mL，避光冷藏 3 个月。
试剂四：抑制剂，液体 2mL×1 支。打开后装在空的小塑料
瓶内（附空瓶一只），室温保存 6 个月。
试剂五：透明剂，液体 6mL×1 支，室温保存 6 个月。天冷
时会有沉淀或混浊，须在 37℃水浴加热至透明后
方可使用。
生理盐水：60mL×2 瓶，室温保存 6 个月。
二、操作过程：
1、样品前处理：
组织样本：准确称取组织重量，按重量（g）:体积（mL）
=1:9 的比例，加入 9 倍体积的生理盐水，
冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分，离心
10 分钟，取上清液待测（同时取部分上清
测定蛋白浓度。
血清（浆）：取不抗凝或抗凝全血 1000～1500 转/分，
离心 8 分钟，取上层血清（浆）。一般测定
时将血清或血浆用生理盐水 1︰9 稀释（具
体稀释浓度以预实验结果为准）。
全血样本：取 0.1mL 抗凝全血加双蒸水至 10mL，即按
1︰99 稀释，充分混匀。如果您的样本量很
少，可以减少取样量。例如取 0.01mL 或
0.02mL 抗凝全血加双蒸水至 1mL 或 2mL。
取 a mL（一般为 0.1mL）进行检测，每个
样本取样前必须充分混匀。
四、测定意义：
胆碱酯酶是胆碱能神经递质乙酰胆碱的水解酶，直接
参与植物神经功能调节、肌肉运动、大脑思维、记忆等重
要功能。胆碱酯酶活力有改变时，以上各组织器官功能也
会有改变。另外，有机磷农药是胆碱酯酶的特异性抑制物，
它通过各种途径进入机体后可抑制胆碱酯酶活性。
五、测定原理：
乙酰胆碱酯酶（Acetyl choline esterase）水解乙酰胆碱
生成胆碱及乙酸，胆碱可以与巯基显色剂反应生成 TNB（对
称三硝-基苯，Sym-Trinitrobenzene）黄色化合物，根据颜色
深浅进行比色定量，水解产物胆碱的数量可反应胆碱酯酶
的活力。
六、本法优点：
1、灵敏度高。微量样品即可测出乙酰胆碱酯酶的水平。
2、可以分型。另有配套试剂盒可测丁酰胆碱酯酶。
3、方法简便快速，准确稳定。
4、无需气相色谱等高级仪器，只要一般分光光度计即可。
5、本法适用于分光光度计或酶标仪（取 200μL 反应液到
96 孔板中 412±10nm 处读数）测定。
乙酰胆碱酯酶(AChE)测定试剂盒