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环磷酸腺苷放免检测服务

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  • 2025年07月15日
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      信帆生物

    环磷酸腺苷放免检测服务
    环磷酸腺苷放免试剂盒操作说明书
    一、供应试验
    1.BSA 1 瓶（用于配制 0.2%BSA 的醋酸缓冲液）：溶于 15 毫升 50mM PH 4.75 的醋酸缓冲液（配法见后）
    2.乙酰化剂试剂：使用前将三-乙胺和醋酐混匀即可(三-乙胺和醋酐各一瓶)
    3.125 I- CAMP1 瓶：使用时用 50 mM 醋酸缓冲液 10 毫升稀释标记品（约 2 万 CPM 左右/0.1ml）.
    4. CAMP 标准 1 瓶：取 100 微升，用 2.6 毫升 50 mM 醋酸缓冲液稀释为 2pmol/0.1ml，然后倍比稀释
    成 8 个浓度点：1、0.5、0.25、0.125、0.062、0.031、0.016、0.008pmol/0.1ml (B1～B8)。
    5. CAMP 抗血清一瓶：使用时用含 0.2%BSA 的醋酸缓冲液 13 毫升溶解
    6.羊抗兔 IgG 血清 1 瓶，每瓶用 10 ml 生理盐水溶解即可，4℃保存。
    7.正常兔血清 1ml，用 10 ml 生理盐水溶解即可 4℃保存。
    8、EDTA 抗凝剂 1 瓶。
    9、醋酸缓冲液 1 瓶： 1：4 稀释（1 份该液加 3 份蒸馏水）。
    三、计算
    NSB 为非特异结合管，标准曲线及样本测得值均需减去 NSB 值，以 B/B0 计算标准及待测样品结合百
    分率，在半对数纸上绘制标准曲线，并查出样品值。或由γ计数器预先编制得程序，直接给出有关参数、标
    准曲线及样品浓度。或从 EXEL 表格中的直线回归方法计算。所得结果乘以稀释倍数即可。
    四、样品收集
    1、需配试剂
    1） EDTA 抗凝剂。取 9.3 克 EDTA 二钠盐加入 1mol/L NaOH 溶液 25ml，溶解后加水到 50ml.。
    2） 50mMPH4.75 醋酸缓冲液，（含 4mM EDTA）：取 27.22 克 NaAc . 3H20 溶于 1000ml 蒸馏水，即
    为 0.2M NaAc，用冰-醋酸配制 0.2M 醋酸，然后取 410 毫升 0.2M HAC 和 590 毫升 0.2M NaAc 混匀，测
    PH 值调到 PH 4.75，然后每 1000 毫升溶液加入 5.95 克 EDTA 二钠盐溶解即可.此溶液为 200 Mm pH
    4.75 的醋酸缓冲液，EDTA为16mM。使用时将该液1：4稀释。
    （1份该液加3份蒸馏水）即成50mM pH4.75 醋酸缓冲液，含 EDTA 4Mm.
    2、血样本处理
    1） 取静脉血 1～2ml，注入含 DETA 抗凝剂 50ul 的试管中，摇匀，一小时内离心 4℃，2000rpm 离心 10min，
    分离血浆， —20℃保存，严禁反复冻融。
    2） 血浆处理：取 0.1ml 血浆加入 2ml 无水乙醇，振摇 1 分钟，静置 5 分钟，3000 转/分离心 10 分钟。
    将上清液到入指形管或青霉素小瓶，残渣再加入 75%乙醇 1ml，匀浆，3000rpm 离心 10 分钟。合并上清
    液，于 60℃烤箱中吹干，残渣放于 4℃保存。测量时用 1ml 醋酸缓冲液溶解，然后取 0.1ml 测量，此时稀
    释倍数为 100。结果×100 即为 pmol/ml.
    3、组织样品处理
    取组织 50 毫克左右放入盛有 2ml 冷的 50mM PH4.75 醋酸缓冲液的试管内(冰浴)，匀浆，加入 2ml 无水
    乙醇，混匀，静止 5 分钟，3500 转离心 15 分钟，将上清液收集在青霉素小瓶内，再用 75%乙醇 2ml 洗沉
    淀，匀浆分散，混匀，3500 转离心 15 分钟。合并上清液,60℃烤箱中吹干，残渣放于 4℃保存。测量时用
    1ml 醋酸缓冲液溶解，然后取 0.1ml 测量。
    4、对于血、组织样本，不同血样或组织中的 CAMP 或 CGMP 含量不同，测试前最好预实验确定样品稀释度。
    五、正常人血浆参考值：
    CAMP:23.1±7.7pmol/ml

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